[发明专利]一种检测黄曲霉毒素M1的试剂盒

说明书

技术领域

一种检测黄曲霉毒素M₁的试剂盒，属于酶联免疫吸附分析 (ELISA)技术领域，用于对乳制品中黄曲霉毒素M₁（简称AFM₁）含量的检测。

背景技术

黄曲霉毒素（AFM₁)是真菌黄曲霉Hspergillus flavus和寄生曲霉A.parasilicus 菌株产生的一组强毐性的次生代谢产物，黄曲霉毒素（AFT)目前已发现20余种，其中黄曲霉毒素 B1为毒性及致癌性最强的物质。黄曲霉毒素Ml是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。当哺乳动物摄入AFB₁污染的饲料后，在体内经羟基化会将AFM₁分泌于乳汁当中。奶牛经摄入黄曲霉毒素B₁污染的饲料后产出的牛奶中便含有黄曲霉毒素M₁。由 于黄曲霉毒素M₁相当稳定，巴氏灭菌法也无法将其杀灭，所以检测黄曲霉毒素M₁不仅要检 测动物饲料原料，而且要检测最终产品。为此世界各国都规定了牛乳及其制品中黄曲霉毒素M₁的最大允许含量并将其作为强制性标准，如中国政府规定牛乳及其制品（消毒牛奶、新鲜生牛乳、全脂牛奶粉、淡炼乳、甜炼乳、奶油）中黄曲霉毒素M₁的最高允许含量为0. 5μg/ml。

现有技术中常用的黄曲霉毒素检测技术主要有薄层层析法（TLC)、高效液相色谱 法（HPLC)、免疫学分析法。前两者具有样品前处理步骤繁琐，耗时费力，仪器价格昂贵，需要 专业人员操作等的缺点，而免疫学分析法具有特异性强、样品前处理简单、成本低、对实验 人员和环境的污染危害小等优点。最常用的免疫学分析法有酶联免疫吸附法、纳米金免疫层析法等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测AFM₁的试剂盒，用于对乳制品中AFM₁含量的检测。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测黄曲霉毒素M₁的试剂盒，包括盒体和盒内的一块24孔AFM₁包被反应板，一个反应盖板，12瓶试剂和放试剂的下凹瓶位，一个冰袋，一个框架，一份说明书，一包吸水纸，2支一次性滴管和一份质检报告，其特征在于：包被反应板是采用24孔试剂板作为固相载体，12瓶试剂分别6瓶AFM₁标准品溶液、酶标抗原、酶标抗原稀释缓冲液、浓缩洗涤液、底物液、显色液、终止液，下凹瓶位共16个。

盒体是硬纸盒；24孔的AFM₁包被反应板，放于真空铝箔袋内；框架为白色48孔塑料框架，框架孔大小与AFM₁包被反应板微孔大小相配；反应盖板是塑料硬盖，大小与框架大小相配；AFM₁标准品溶液均用黑色帽的棕色玻璃瓶，酶标抗原用白色帽的棕色玻璃瓶，酶标抗原稀释缓冲液用绿色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用白色帽的白色PE塑料瓶，底物液用蓝色帽的白色PE塑料瓶，显色液用黑色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶；下凹瓶位由塑料泡沫制成。

本发明的有益效果是：该试剂盒结构简单，使用方便、廉价、灵敏度高，可以达 到0.lng/ml以上。

附图说明

图1是本发明的外观示意图。

具体实施方式

下面结合附图，进一步说明本发明的具体实施方式：

先将样品进行处理：

牛奶

将含脂牛奶降温至10℃以下，3500转/min下离心10min，用吸管弃去上层脂肪层，下层牛奶液即为待测样液。（脱脂牛奶直接测定）。

奶粉

称取5g奶粉于100ml三角瓶中，加入40ml蒸馏水，振摇5min，使其完全溶解（脱脂牛奶制成奶粉的固化比例为每40ml脱脂牛奶制成5克奶粉）。以下步骤同上述牛奶处理方法。

实验准备

1、 浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍，使用前稀释。（例如：3ml浓缩洗涤液+57ml蒸馏水，足够24孔使用）

2、AFM₁酶标抗原工作溶液配制方法：在使用前，取1瓶AFM₁酶标抗原，准确加入1.5ml酶标抗原稀释液，混匀，配制成实验用AFM₁酶标抗原工作溶液，够24孔反应板使用。

 

实验步骤