[发明专利]一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒

说明书

技术领域

一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，属于酶联免疫吸附分析 (ELISA)技术领域，用于对粮食，饲料及其食品中赭曲霉毒素A (简称OTA)含量的检测。

背景技术

赭曲霉毒素A (OTA)是真菌曲霉ochraceous和几种Penicillium真菌产生的 一种毒素。0TA已经被证明对动物及人的肾产生损害，也是一种致癌物质，霉菌毒素引起的中毒大多通过被霉菌污染的粮食，油料作物以及发酵食品等引起，而且霉 菌毒素中毒往往表现为明显的地方性和季节性，临床表现较为复杂，有急性中毒、慢性中毒以及致癌、致畸和致突变等。0TA在大多数谷物中均可分离到，包括大麦、小麦、燕麦、玉米、咖啡豆等，以这些谷物作为饲料的家禽也会受到污染，因此为了保障人们的健康，开展食品中0TA的卫生检测研究是很有必要的。

第56次FA0/WH0食品添加剂联合专家委员会(JECFA)会议对0TA进行了危险性 评价，得出的结论是体内和体外试验显示0TA都具有遗传毒性，考虑到小麦、大麦 和黑麦等谷物是摄入(TTA主要的食物品种，决定制定这些食物中0TA的限量标准， 会议认为这些食物及其制品中0TA限量为5ug/kg。到目前为止，已有11个国家 制定了食品(l-50ug/kg)和饲料（100-1000Pg/kg)中的OTA的限量标准，主要是欧洲国家，我国尚无粮食中的0TA限量标准。

因而作为国际食品安全评价机构的JECFA很少能得到我国的污染监测和暴露 量评估数据，使我们始终处于被动地位。另外对于食品、农副土特产品、保健品等 出口到欧盟市场，其检验检疫必须符合有关0TA、黄曲霉、污染农药等食品安全规 定的要求，在这方面我国产品的出口已遭受了很多的损失，而且进口方面，也迫切要求建立一个完善、方便的检测手段。因此，尽快建立高灵敏的0TA的检测，积极 开展0TA的研究是当务之急。

目前赭曲霉毒素A的测定方法有多种，如：薄层色谱法TLC (灵敏度为 10ug/ml)，高效液相色谱法HPLC (灵敏度为10ug/ml)，免疫荧光染色法（灵敏度0. 025ug/ml)，但由于费时，灵敏度低，仪器设备昂贵，操作复杂且不适用于大 批量样品的检测等缺点，已被逐步淘汰。酶联免疫测定法ELISA (灵敏度为 0.25ng/ml),由于其特异性强，灵敏度高，操作简便，不需直接接触毒素,且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。尽管如此，检测的灵敏度和试剂的稳定性还无法达到要求，致使无法实际应用，所以目前为止没有一个国产的试剂盒面市。

发明内容

本发明的目的在于提供本发明的目的在于提供一种检测OTA的试剂盒，用于对粮食， 饲料及其食品中OTA含量的检测。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测赭曲霉毒素A的试剂盒，包括盒体和盒内的一块24孔OTA包被反应板，一个反应盖板，14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位，一个冰袋，一个框架，一份说明书，一包吸水纸，2支一次性滴管和一份质检报告，其特征在于：包被反应板是采用24孔试剂板作为固相载体，14瓶试剂分别6瓶OTA标准品溶液、酶标二抗、OTA抗体、抗体稀释缓冲液、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液、显色液、终止液，下凹瓶位共16个。

盒体是硬纸盒；24孔的OTA包被反应板，放于真空铝箔袋内；框架为白色48孔塑料框架，框架孔大小与OTA包被反应板微孔大小相配；反应盖板是塑料硬盖，大小与框架大小相配；OTA标准品溶液均用黑色帽的棕色玻璃瓶，酶标二抗用绿色帽的棕色玻璃瓶，OTA抗体用白色帽的白色PE塑料瓶，抗体稀释缓冲液用绿色帽的白色PE塑料瓶，样品稀释液用兰色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用白色帽的白色PE塑料瓶，底物液用蓝色帽的白色PE塑料瓶，显色液用黑色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶；下凹瓶位由塑料泡沫制成。

 本发明的有益效果是：该试剂盒结构简单，使用方便、廉价、灵敏度高，可以达 到0.lng/ml以上。

附图说明

图1是本发明的外观示意图。

具体实施方式

下面结合附图，进一步说明本发明的具体实施方式：

          先将大麦样品进行处理：将大麦样品粉碎至20目，取5克样品放在试管中，加入提取液12.5ml (甲醇：水=7: 3)。加塞振荡3分钟，过滤，滤纸采用新华1号纸。取lml滤液用lml蒸馏水或去离子水进行稀释，备用。

实验准备

 浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍，使用前稀释。（例如：3mL浓缩洗涤液+57mL蒸馏水，足够24孔使用）