[发明专利]鸭黄病毒病灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于动物疫苗领域，涉及一种鸭黄病毒病灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

“鸭黄病毒病”（暂名）又名“鸭出血性卵巢炎”、“蛋鸭黄病毒病”、“鸭高热减蛋综合征”和“新型黄病毒BYD引起的产蛋下降综合征”是2010年在中国浙江、福建、山东、广东等地首次发现的一种新鸭病，主要发生于蛋鸭、也发生于种鹅、肉鸭。蛋鸭发生此病时，临床表现为肢体站立不稳，行走困难，采食量下降，产蛋量骤然减少，减蛋幅度很大，5天内减蛋超过90%或者绝产，部分病鸭在数日内死亡，死亡率为5%～10%。剖检病变为卵巢发生出血、萎缩、卵泡破裂或萎缩等。此前，国内外未见类似疫病。2010年藤泽泱、曹贞贞、万春和等、2011年苏敬良等证明该病病原属于黄病毒科黄病毒属鸭黄病毒(Flaviviridae, Flavivirus,Duck flavivirus)。

2011年胡奇林等从广东省发生“鸭黄病毒病”的蛋鸭中分离到1株鸭黄病毒JM株，对JM进行了鉴定，测定了JM株部分理化和生物学特性，并进行了动物回归试验等。

迄今为止，未见国内外有关“鸭黄病毒病”疫苗特别是灭活疫苗研究的报道。因此，研制一种安全有效的“鸭黄病毒病”疫苗对我国养鸭业的发展具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭黄病毒病灭活疫苗，该灭活疫苗安全性好，免疫效果可靠。

本发明的另一个目的在于提供上述疫苗的制备方法。

本发明所采用的技术方案如下：

一种鸭黄病毒病灭活疫苗，含有经灭活的鸭黄病毒（Flaviviridae, Flavivirus,Duck flavivirus）毒株及佐剂。

优选的，所述佐剂为法国SEPPIC公司Montanide ISA 71 VG佐剂。

优选的，所述鸭黄病毒毒株为鸭黄病毒JM株，已于2011年10月14日送交中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC V201131。

上述的“鸭黄病毒病”灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

1）将鸭黄病毒毒株的生产用种毒进行大规模培养，收获病毒液；

2）将收获的病毒液灭活；

3）将灭活后的病毒液加入佐剂中，乳化后即得。

优选的，步骤1）的具体操作为：将鸭黄病毒毒株的生产用种毒经尿囊腔接种10~12日龄麻鸭胚或8～11日龄鸡胚或10~13日龄番鸭胚，37℃培养，收集接种后48~120小时死亡胚，置于4~8℃冷却4~24小时，无菌收获含毒尿囊液。

优选的，步骤2）的具体操作为：将收获的含毒尿囊液加入甲醛至总量的0.2%~0.3%，于37℃灭活20~28小时。

优选的，步骤3）的具体操作为：将20~40体积份灭活后的病毒液加入60~80体积份的佐剂中，在高速匀浆机中乳化。

鸭黄病毒JM株，已于2011年10月14日送交中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC V201131。

本发明的有益效果在于：

本发明的灭活疫苗安全性好，分别以1.5ml/只和2.5ml/只接种产蛋鸭后未见明显不良反应；免疫效果好，对产蛋鸭以该疫苗1.5ml/只免疫后14天/12天用强毒进行攻击，结果，攻毒对照组从攻毒后第2天开始产蛋明显下降，第8天开始停止产蛋或者降低至20%，攻毒后17天内平均产蛋率为17.8%/20.3%，而本发明的疫苗免疫组攻毒后17天内平均产蛋率为67.03%/67.2%～71.7%，保护率为60%/59%～65%，白油佐剂疫苗对照组攻毒后17天内平均产蛋率为29.3%/33.1%，保护率为14%/16.4%，表明本发明的疫苗免疫鸭产蛋量比未免疫攻毒对照组及白油佐剂疫苗对照组鸭有显著提高，证明该疫苗能保护蛋鸭抵抗强毒的攻击，可以用于临床上预防“鸭黄病毒病”，具有重大的经济和社会效益。

附图说明

图1为黄病毒科黄病毒属鸭黄病毒广东株（JM）的电镜照片（100，000×）；

图2为JM株的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图（泳道1-6均为疑似ARV临床病料、泳道7为ddH₂O，泳道8、9、14、15和17分别为: JMDE3、JMDE4、JMDE1、JMDE2和JMDE5；泳道10-13分别为NDV、ARV、IBDV和MDRV；泳道16为DNA 分子量Marker）

图3为鸭黄病毒JM株基因组ORF 7个片段基因的RT-PCR扩增结果；