[发明专利]培育金线兰抗逆组培苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于组培育苗技术领域，具体说涉及一种培育金线兰抗逆组培苗的方法。

背景技术

金线兰(Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.)又名花叶开唇兰，为兰科开唇兰属植物，是民间作为“金线莲”药材使用的正品，具有多种药用功效，素有“药王”、“药虎”、”金草”、”神药”、”乌人参”等美称；除药用外，因其具有降血酯、抗氧化等功效，且药性温和、不热不燥，台湾地区居民将其作为珍贵的健康补品使用，开发出饮料、口服液等系列产品；此外，由于其叶片十分美丽，被养兰家誉为观叶兰中的圣品。但由于金线兰对生态环境要求严格，自然繁殖和生长缓慢，加上鸟兽喜食和药农的大量掠夺性采挖，使其自然资源日渐稀少，趋于枯竭。金线兰种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，一般不易萌发，以分根法或扦插法繁殖，繁殖系数低，很难形成规模种植。组织培养可在短时间内繁殖出大量新生植株，是植物快速繁殖的一种有效手段。

近些年，不少地区开展了金线兰组培快繁技术的研究，但报道多局限于培养成功，可以快繁，未考虑组培苗对环境的适应能力。

金线兰属中阴性植物，性喜温凉潮湿环境，分布于植被覆盖较好、荫蔽度为60％～80％、林内凉爽、土壤腐殖质丰富、水湿条件优越、林中常云雾弥漫、空气相对湿度85％～95％的环境中，尤喜生长于山涧常绿阔叶林下枯枝落叶层、沟边、岩缝、石壁、树兜等阴湿处，对生态条件要求严格，适应性差，不耐干旱，生长适宜温度是23℃-25℃，冬惧严寒，夏忌高温，耐热抗冷性弱，温度超过28℃生长即受抑甚至出现大量死亡的现象，且易导致病虫害，5℃以下生长不良或停止生长。因此，提高金线兰组培苗的抗逆性以适应自然环境条件，是人工栽培能否取得成功的关键所在。

在组培过程中结合诱抗处理培育抗逆种苗，未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种培育金线兰抗逆组培苗的方法，采用如下技术方案：

一种培育金线兰抗逆组培苗的方法，包括以下步骤：

A1、初代培养：采取茎段直立插入的方式接种于MS+BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L+(0.5-0.6)mg/L硫脲+(0.5-0.6)mg/L Vc的培养基；置于光照12小时/天，光强1500lx-2000lx，温度23±2℃的条件下培养，培养60天可得到无菌芽；

A2、增殖培养：用解剖刀将无菌芽切下，采取直立插入的方式接种于MS+BA3.0mg/L+KT3.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L的培养基，培养于光照12小时/天，光强1500lx-2000lx，温度23±2℃的条件；在继代三代后应调整培养基配方为：MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L；

A3、生根培养+抗逆诱导：在超净工作台上，将无根苗从培养瓶中取出，采取直立插入的方式接种于生根培养基：1/2MS+NAA 3mg/L+蔗糖20g/L，培养基中还加有自制诱抗剂：ABA1.3mg/L+SA2.5mg/L+CTS30mg/L；培养于光照12小时/天，光强1500lx-2000lx，温度23±2℃的条件，60天，生根可达2-3条/株；

A4、炼苗移栽；将组培瓶移到炼苗室放置3天，将瓶盖旋松放置2天，将瓶盖打开一部分再放置2天，将苗从瓶中取出，洗净琼脂，用多菌灵浸泡根部，移栽入松针土中，早晚喷水，保持湿度，10天后可观察到叶片返青，幼叶开始生长，继续培养30天后可见到长出新叶，表明移栽的苗已经成活。

现有的金线兰组培快繁技术仅考虑快速繁殖，未考虑提高组培苗对环境的适应能力，由于金线兰对生态条件要求严格，适应性差，因此，提高金线兰组培苗的抗逆性以适应自然环境条件，是人工栽培能否取得成功的关键所在。本发明将快速繁殖与苗的抗逆性结合起来考虑，目的在于提供一种培育金线兰抗逆组培苗的方法，这是本发明的关键点。

附图说明

图1为继代三代调整配方后得到的无根苗；左：使用原培养基配方生长情况；右：调整配方后得到的健壮的无根苗；

图2为常规苗和抗逆苗在高温胁迫下的相对电导率；

图3为常规苗和抗逆苗在高温胁迫下的SOD活性。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

实施例1