[发明专利]一种简便、高效诱导辣椒疫霉菌产生游动孢子的方法

说明书

技术领域

本发明属于农业植物保护技术领域，具体涉及一种简便、高效诱导植物病原菌辣椒疫霉菌产生大量游动孢子的方法。

背景技术

由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)侵染引起的辣椒疫病是一种毁灭性的世界病害，该病害在适宜发病的条件下，可在短期内暴发成灾，病原菌可侵染辣椒引起根、茎和果实腐烂，甚至造成寄主作物绝收，给辣椒生产造成严重的经济损失。

辣椒是我国的传统产业，改革开放以来，随着市场经济的推进，我国辣椒产业每年以7%的速度发展，我国辣椒出口也在不断增长，韩国、日本、澳大利亚、美国和东南亚等已成为我国辣椒的常年进口国。由于辣椒的适应性强，栽培区域广泛，种植辣椒的经济效益和社会效益都很高，对于中国蔬菜市场的周年供应有重要意义，辣椒已成为我国部分贫困山区脱贫致富的好帮手、城市菜篮子的当家菜。但是近年来，辣椒疫病在我国不少省份发生为害日益严重，重病田死秧率达30-100%，成为影响我国辣椒生产的重要障碍，如何有效地对辣椒疫病进行综合管理并使之造成的经济损失降低至最小是农业科研推广部门的一大挑战。

研究并明确辣椒疫病发生流行规律是制定病害综合管理措施的前提条件，研究病害流行规律需借助病原菌人工接种技术，而通过分离纯化获得目标病原菌的纯培养，再由纯培养获得大量的人工接种体是人工接种的第一步。在辣椒疫病研究中人工接种体是游动孢子，传统的获得游动孢子的方法是获得孢子囊，再通过刺激孢子囊使之释放游动孢子，从而获得最终的接种体。辣椒疫霉菌产生游动孢子的传统或常规方法比较复杂，操作步骤繁多，产孢量低，产孢时间长，且效果不稳定，难以满足大批量接种试验的需求。因此，很有必要建立一种简易、高效的诱导辣椒疫霉菌产生大量游动孢子的方法，旨在为开展辣椒疫霉菌的群体遗传研究及揭示病害的传播和发生规律奠定基础，为建立有效的病害管理措施提供科依据和技术手段。

发明内容

    为了解决上述难题，本发明提供了一种简便、高效诱导辣椒疫霉菌产生游动孢子的方法。

    为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案得以实现。

（1）辣椒疫霉菌菌丝体的培养：将辣椒疫霉菌菌丝块接种于黑麦培养基平板上，置于500-600勒克斯的白色日光灯下连续光照的25℃-28℃培养箱中培养；

（2）辣椒疫霉菌菌丝体的抹伤： 待步聚（1）菌丝长满整个平板后，以无菌的L型玻棒涂抹长满菌丝的平板；

（3）辣椒疫霉菌孢子囊的诱导：将步骤（2）得到的平板放置于500-600勒克斯的白色日光灯下连续光照的28℃生化培养箱中培养24-36h；

（4）游动孢子的释放：在步骤（3）得到的平板中加入无菌水，移至4℃冰箱或生化培养箱中静置1-2h，然后再置于28℃生化培养箱中孵育1-2h；

（5）辣椒疫霉菌游动孢子的收集：用灭过菌的毛笔轻轻拨动步骤（4）得到的培养基平板表面的菌丝，以达到刷洗游动孢子的目的，双层无菌纱布过滤，所得到的过滤液即为辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液。

本发明的显著优点：

诱导辣椒疫霉菌产生大量孢子囊或游动孢子对开展辣椒疫霉菌的生物学、生态学、遗传分析、分子分析以及致病性测定和制定植物病害适时有效的综合管理措施等研究都具有重要的意义。辣椒疫霉菌孢子囊和游动孢子的传统诱导方法也能产生孢子囊和游动孢子，这些方法步骤比较复杂，且产生孢子囊的数量不稳定，比如土壤浸出液法和黄瓜接种保湿法（发明专利申请号201110022114.2）也能诱导辣椒疫霉菌产生大量的孢子囊，但这些方法要求需不断的换水或保湿，而且要通过收集孢子囊后再刺激游动孢子释放，存在工作量大的缺点，无法满足大量试验的需求。本发明采用了抹伤辣椒疫霉菌菌丝体，再通过光照和低温刺激受伤菌体可直接产生大量游动孢子，本发明具有取材容易、成本低、操作步骤简便、游动孢子产生时间短等优点。本发明为植物病害辣椒疫病的研究中游动孢子的产生提供了一种经济、快速和有效的简便方法。本发明为实现在短时间内诱导辣椒疫霉菌产生大量游动孢子提供了保证，本发明具有简易、高效、无杂菌污染的优点，对于开展辣椒疫病的研究具有重大意义。

附图说明

图1 辣椒疫霉菌菌丝体抹伤处理；

图2 辣椒疫霉菌孢子囊形态特征；

图3 辣椒疫霉菌游动孢子释放。

具体实施方式

下面结合实例对本发明一种简便、高效诱导辣椒疫霉菌产生游动孢子的方法进一步描述。

实施例1：