[发明专利]抑制PAR-1基因表达的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抑制PAR-1(蛋白酶激活受体-1)基因表达的siRNA(小分子干扰RNA)及其应用。

背景技术

几乎所有肝病均具有炎症坏死，而只要有炎症坏死，肝纤维化即发生。肝纤维化的不断发展，引起肝小叶结构改建和假小叶形成，导致肝硬化；纤维组织压迫血管，引起门脉高压和肝缺血，进而加剧肝细胞坏死和炎症，如此形成恶性循环。因此，阻断肝纤维化的发生和发展，对防治肝硬化具有重要意义。而且我国肝病发病率是比较高的国家之一，所以寻找有效途径抑制肝纤维化，有相当重要的意义。

肝纤维化和它导致的最后阶段的肝硬化，通常是由病毒感染，过度使用损害肝脏的药物，代谢系统疾病，和遗传因素引起的。肝纤维化的病理进程，实际上是正常的肝组织被疤痕类似的胶原蛋白代替，导致肝功能的丧失，过去认为这个过程是一个不可逆的过程，直到最近才认为这个过程在早期是可以挽救的。根据目前的研究，表明星状细胞在这个过程中起了关键作用。正常的肝脏中，星状细胞大约占肝体积的1.4％，相当于每100个肝细胞中大约有3.6-6个星状细胞。纤维化的过程实际上是来自于门静脉和窦周的α平滑肌细胞骨架阳性的肌纤维母细胞产生和增殖的过程。虽然这种细胞有不止一种的潜在来源，但被研究的最为清楚的就是肝星状细胞，在它们没有被活化成α平滑肌细胞骨架阳性表型的细胞之前，它们的主要功能是贮存维生素A，调节维甲酸的水平。可一旦被活化后，它们就成为肝纤维化中纤维胶原的主要来源，而且它们通过收缩和释放致炎和致纤维因子，潜在的调节窦间隙的血流量。活化的星状细胞还能产生基质金属蛋白酶组织抑制剂，导致基质金属蛋白酶降解肝细胞外基质的功能受损，从而使细胞外基质向胶原和纤维化转变。

随着RNAi作为制药技术的成熟，已有siRNA药物进入临床实验，siRNA药物具有如下优点：(1)、特异性强，碱基的顺序决定了它的特异性；(2)、设计便利，由于人类基因库已经完成，这为siRNA的设计带来了极大的便利，可以说几乎没有基因不能作为siRNA的靶标；(3)、临床研究便利，siRNA药物作为核酸类药物，不管何种siRNA都具有大致相同的药物代谢，药物分布，药物毒性，这为进入临床研究带来了极大的便利；(4)、由于RNAi一开始就已将特定基因作为靶标，所以siRNA分子药理学明确。

发明内容

本发明的目的在于利用RNAi(RNA干扰)技术，对候选的靶标基因进行效用、量效关系及特异性的评定，以提供能够抑制PAR-1(蛋白酶激活受体-1)基因表达的siRNA(小分子干扰RNA)，并进一步地提供该siRNA在临床上的应用。

按照本发明提供的技术方案，所述siRNA为下述PAR-1-01～PAR-1-08中的任意一种，PAR-1-01～PAR-1-08分别为：

PAR-1-01：

正义链序列SEQ ID NO.1为5′-AGGGCAGUCUACUUAAAUA-3′

反义链序列SEQ ID NO.2为5’-UAUUUAAGUAGACUGCCCU-3’

PAR-1-02：

正义链序列SEQ ID NO.3为5′-CGGCCGUGGUGUACAUGCU-3′

反义链序列SEQ ID NO.4为5′-AGCAUGUACACCACGGCCG-3′

PAR-1-03：

正义链序列SEQ ID NO.5为5′-CCUUCAAGAUCAGCUACUA-3′

反义链序列SEQ ID NO.6为5′-UAGUAGCUGAUCUUGAAGG-3′

PAR-1-04：

正义链序列SEQ ID NO.7为5′-ACAUGUACGCCUCCAUCAU-3′

反义链序列SEQ ID NO.8为5′-AUGAUGGAGGCGUACAUGU-3′

PAR-1-05：

正义链序列SEQ ID NO.9为5′-GCAUCUUCAUCGUCUGCUU-3′

反义链序列SEQ ID NO.10为5′-AAGCAGACGAUGAAGAUGC-3′

PAR-1-06：

正义链序列SEQ ID NO.11为5′-CCACCAACGUCCUCCUGAU-3′

反义链序列SEQ ID NO.12为5′-AUCAGGAGGACGUUGGUGG-3′

PAR-1-07：

正义链序列SEQ ID NO.13为5′-GCAGGGCAGUCUACUUAAA-3′