[发明专利]一种两歧双歧杆菌抗冻培养基及其应用方法

说明书

技术领域

本发明属于双歧杆菌制品生产技术领域，涉及一种提高冻干存活率的两歧双歧杆菌抗冻培养基及其应用方法。

背景技术

双歧杆菌(Bifidobacteria)最早于1899年由法国学者Tissier从母乳营养婴儿的粪便中分离出，该菌形态多变，常呈Y字形、V字形、弯曲、棍棒、鹿角状或分叉，故称双歧杆菌。目前已发现的双歧杆菌有36种，其中从人体分离的有12种，国家卫生部规定可用于保健食品的有5种，分别为两歧双歧杆菌(B.bifidum)，短双歧杆菌(B.breve)，长双歧杆菌(B.longum)，青春双歧杆菌(B.adolescentis)，婴儿双歧杆菌(B.infantis)。双歧杆菌伴随人体的一生，只有在患病、衰老或其他不利条件下才减少，甚至消失。作为一种优良的生态菌种，双歧杆菌与机体的健康状况密切相关，具有抑制肠道病原菌生长、改善蛋白质代谢、提供维生素、降低胆固醇、提高免疫机能等生理功能，因此已被开发成微生态制剂广泛应用于医疗、保健和食品等领域，并已成为微生态制剂的核心。

真空冷冻干燥是制备和保存双歧杆菌最有效的方法之一，双歧杆菌细胞在冻干过程中要经受冷冻和干燥两种激烈因素的作用，导致菌体死亡。影响两歧双歧杆菌冻干效果的因素有很多，主要有菌株自身特性、培养基、培养条件、菌龄、预冻条件、菌悬液浓度、冻干保护剂、亚致死处理等，目前对两歧双歧杆菌冻干菌粉的研究主要集中在制备过程中冻干保护剂的筛选方面，并获得了各种冻干保护剂配方，如ZL200610012689.5中公开了一种高活性双歧杆菌干粉制剂的复合保护剂，其配方组成为β-环糊精10g、乳糖2-5g、海藻糖0.5-2.0g、酵母膏0.5-2.0g，维生素E0.05-0.1g及蒸馏水100ml；ZL200610012690.8中也公开了一种直投式双歧杆菌纯种冻干发酵剂的复合保护剂，其配方组成为脱脂乳粉10g、乳糖3-6g、海藻糖1.0-2.0g、吐温800.05-1.0g、酵母膏0.5-1.0g，血清0.5-1g、维生素E0.05-0.2g及蒸馏水100ml；ZL200710006529.4中也公开了一种双歧杆菌活菌制剂及其专用保护剂，其配方组成为甘油0.01-5.0份，聚乙烯吡咯烷酮0.1-6.0份、聚乙二醇0.1-5.0份、脱脂奶粉1.0-10.0份、海藻糖0.5-15.0份、谷氨酸钠0.1-5.0份、L-天冬氨酸0.1-5.0份、维生素C钠0.1-5.0份、鸟氨酸盐酸盐0.1-5.0份。目前，尚没有研究培养基组成对两歧双歧杆菌冻干存活率的影响，更没有筛选及优化得到提高两歧双歧杆菌冻干存活率的抗冻培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种两歧双歧杆菌抗冻培养基及其应用方法，该抗冻培养基解决了两歧双歧杆菌在冻干过程中存在的冻干存活率不高，活菌数低、冻干菌粉容易吸水潮湿以及不便在非乳制品如制剂、胶囊等中使用的问题。

一种两歧双歧杆菌抗冻培养基，该抗冻培养基的配方组成包括以下组分：16-20g乳糖、3-5g酵母提取物、6-9g氯化钠、0.6-1.0g山梨醇、0.2-0.5g谷氨酸，8-12g大豆蛋白胨、0.5-2.0g柠檬酸氢二铵、0.2-0.5g甜菜碱、1.0-2.5g磷酸氢二钾、0.4-0.8g抗坏血酸钠、0.1-0.2g MgSO₄、0.5-1.0ml吐温80、3-5g半胱氨酸盐酸盐和1000ml蒸馏水。

所述抗冻培养基的配方组成包括以下组分：18g乳糖、4g酵母提取物、7g氯化钠、0.6g山梨醇、0.3g谷氨酸，10g大豆蛋白胨、1.5g柠檬酸氢二铵、0.3g甜菜碱、2.0g磷酸氢二钾、0.5g抗坏血酸钠、0.15g MgSO₄、1.0ml吐温80、4g半胱氨酸盐酸盐和1000ml蒸馏水。

所述抗冻培养基的配方组成包括以下组分：20g乳糖、5g酵母提取物、6g氯化钠、0.8g山梨醇、0.4g谷氨酸，8g大豆蛋白胨、2.0g柠檬酸氢二铵、0.5g甜菜碱、1.0g磷酸氢二钾、0.8g抗坏血酸钠、0.2g MgSO₄、1.0ml吐温80、3.5g半胱氨酸盐酸盐和1000ml蒸馏水。

所述抗冻培养基的制备方法，包括以下步骤：