[发明专利]一种甘露聚糖酶重组表达载体和一种可自身分泌甘露聚糖酶转基因猪的培育方法

权利要求书

1.一种甘露聚糖酶重组表达载体，其特征在于该重组表达载体是将外源的甘露聚糖酶基因和调控元件拼接后，插入到真核表达载体中，构建得到由调控元件调控表达的甘露聚糖酶重组表达载体。

2.根据权利要求1所述一种甘露聚糖酶重组表达载体，其特征在于所述外源的甘露聚糖酶基因是指来源于微生物、酵母或昆虫中的甘露聚糖酶基因。

3.根据权利要求2所述一种甘露聚糖酶重组表达载体，其特征在于所述外源的甘露聚糖酶基因是指黑曲霉甘露聚糖酶基因manA。

4.根据权利要求1所述一种甘露聚糖酶重组表达载体，其特征在于所述调控元件为口腔组织特异表达的调控元件、腮腺组织特异表达的调控元件，胃组织特异表达的调控元件或肠组织特异表达的调控元件。

5.根据权利要求1所述一种甘露聚糖酶重组表达载体，其特征在于所述真核表达载体为pCMVp-NEO-BAN、pEGFP、pEGFT-Actin、pcDNA^TM3.1/myc His或pcDNA6/His^TM。

6.一种培育可自身分泌甘露聚糖酶猪重构胚的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

步骤1

将权利要求1~5所述任一项的甘露聚糖酶重组表达载体转染猪胎儿成纤维细胞并经筛选后制备成转甘露聚糖酶基因的核供体细胞；

制备去核猪卵母细胞；

步骤2

将步骤1制备的核供体细胞注入步骤1制备的去核猪卵母细胞中形成重构胚；

将上述重构卵进行激活处理后，得到激活的重构胚。

7.一种可自身分泌甘露聚糖酶的转基因猪的培育方法，其特征在于该培育方法是将权利要求6激活的重构胚进行体外培养后，将发育正常的重构胚通过胚胎移植操作移入代孕母猪子宫内，经过代孕母猪的怀孕，分娩后获得可自身分泌甘露聚糖酶的转基因猪。