[发明专利]一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸡传染性鼻炎灭活疫苗，属于生物学领域，特别是兽用生物制品领域。

背景技术

目前市场流行的鼻炎灭活疫苗主要有两种类型，包括油佐剂和铝胶佐剂疫苗。油乳剂灭活疫苗抗体持续时间较长，但是存在不同程度的副反应。铝胶佐剂灭活疫苗不存在副反应现象，但是抗体效价低，持续时间短。

本发明所述的新型佐剂制备的鸡传染性鼻炎灭活疫苗，具有安全性高、无副反应、抗体产生快以及保护率高等优势，不但适用于鸡群常规免疫，有效预防疫病的发生，并且适用于发病鸡群的紧急接种，对控制本病和防止复发有较好的作用。

发明内容

本发明的目的是用以卡波姆为主要成分组成的疫苗佐剂，将其用于鸡传染性鼻炎灭活疫苗的生产过程中，使生产的鸡传染性鼻炎灭活疫苗具有安全性高、无副反应、抗体产生快以及保护率高等优势，既适合于正常预防也适合于发病时的紧急接种，对控制本病和防止复发有较好的作用。

实施本发明的技术路线：

1.本发明所涉及的鸡传染性鼻炎灭活疫苗，含有灭活的副鸡嗜血杆菌A型C-Hpg-8株浓缩菌液，和以卡波姆为主要成分组成的疫苗佐剂。

鸡传染性鼻炎灭活疫苗的制备方法，按常规方法制备的灭活的副鸡嗜血杆菌A型C-Hpg-8株浓缩菌液，用灭菌PBS稀释一定比例后与以卡波姆为主要成分组成的疫苗佐剂按4∶1比例进行混合并搅拌摇匀制备而成鸡传染性鼻炎灭活疫苗。

具体实施方式

一、疫苗生产检验用菌种

制造及检验用菌种为副鸡嗜血杆菌A型C-Hpg-8株，由中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应。

二、疫苗制造

1.疫苗制造及半成品检验

(1)生产用种子制备

1)一级种子繁殖与鉴定 取菌种划线接种于鸡肉汤琼脂平板上，在含5％～10％CO₂环境中37℃培养16～18小时后，挑选数个荧光性强的典型菌苔(菌落)接种于5日龄鸡胚卵黄囊内，在37℃继续孵育，收集30小时内死亡的鸡胚卵黄液，经纯检合格后，作为-级种子。在-20℃以下保存，应不超过1个月，否则要再通过鸡胚复壮，但不应超过6代。

2)二级种子繁殖取感染的鸡胚卵黄液，划线接种鸡肉汤琼脂乎板，在含5％～10％CO₂条件下，37℃培养16～18小时，选荧光性强的典型菌苔(菌落)接种于鸡肉汤培养基中，置37℃培养16～20小时，经纯检合格后，即为二级种子。在2～8℃保存，不得超过6～8小时。

(2)制苗用培养基 为半合成培养基，制造方法见附注4。

(3)制苗菌液的制备

1)菌液培养 将100ml种子液加入4000ml半合成培养基中，在37℃培养18～20小时，其间接振培养瓶二次，经纯捡确认无杂菌污染，加入0.05％甲醛溶液，置2～8℃保存。

2)制苗菌液的浓缩与灭活 用中空纤维超滤器将纯检合格的菌液浓缩，然后再用pH7.2的PBS制成悬浮液，使每1ml至少含50亿菌体(用生物制品国家标准品“中国细菌浊度标准”进行比较，设标准管含副鸡嗜血杆菌为28亿/ml)，再按体积比加入0.15％甲醛溶液和0.01％的硫柳汞，在2～8℃灭菌7日，经检验无菌生长作为制苗抗原。

(4)佐剂的配制

以卡波姆为主要成分组成的疫苗佐剂的配制：

NaCl  5～10g  (无色立方结晶或白色结晶，上海国药)，

Na₂HPO₄ 1.5～2g  (白色粉末，上海国药)，

KCl 0.1～0.5g  (无色立方晶体，常为长柱状，上海国药)，

KH₂PO₄ 0.1～0.5g    (为无色结晶或白色颗粒状粉末，上海国药)，

卡波姆 3～7g  (白色疏松状粉末，北京国人逸康科技有限公司)，

去离子水1000ml，溶解后经121℃高压30min灭菌后备用。常温保存，不超过15天。