[发明专利]鸡传染性贫血病毒LAMP检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于，包含特异性LAMP引物组，所述的引物组由一对外引物、一对内引物组成，所述引物的核苷酸序列如下：：

正向外引物F3，其核苷酸序列为：5′-TCAGGCCACCAACAAGTTC-3′；

反向外引物B3，其核苷酸序列为：5′-TGGGTTGATCGGTCCTCA-3′；

正向内引物FIP，其核苷酸序列为：5′-CGCAGCCACACAGCGATAGAAACCCCTCACTGCAGAGAG-3′；

反向内引物BIP，其核苷酸序列为：5′-GCTCCCACGCTAAGATCTGCAGTCCGGCACATTCTTGAAAC-3′。

2.如权利要求1所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于还包括一对环引物，所述环引物的核苷酸序列如下：

正向环引物LF，其核苷酸序列为5′-TTGTAATTCCAGCGATACCAATCCG-3′；

反向环引物LB，其核苷酸序列为5′-ACTGCGGACAATTCAGAAAGCAC-3′。

3.如权利要求1或2所述鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于，所述引物组是以Genebank登录的69个国内外CAV毒株100％同源的基因序列532bp～729bp位的198个核苷酸序列为靶区域设计特异性的LAMP引物组。

4.如权利要求3所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于所述的69个国内外CAV毒株Genebank登录号如附录表2所示。

5.如权利要求1或2所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于，所述引物组通过等温环介导扩增反应扩增所述靶区域，确认待测样品中是否含有鸡传染性贫血病毒特定的基因。

6.根据权利要求5所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于，25μL的LAMP扩增反应体系为：

待检测核酸模板（DNA）                        1.0～5.0μL

正向外引物F3                                 0.1～0.8 μM

反向外引物B3                                 0.1～0.8 μM

正向内引物FIP                                 0.2～1.4 μM

反向内引物BIP                                 0.2～1.4 μM

正向环引物LF                                 0.0～0.5μM

反向环引物LB                                 0.0～0.5μM

甜菜碱betaine                                  0.2～1.4μM

dNTP                                         0.4～1.6mM

MgCl₂                                         1.0～3.5mM

反应缓冲液Buffer 10×                           1/10总反应体积

Bst DNA Polymerase                             0.08～1.0μM

ddH₂O                                        加至25μL。

7. 根据权利要求5所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其LAMP扩增条件为：反应温度为60℃～66℃，反应时间为30～70min。

8.根据权利要求5所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于靶基因扩增产物是通过产物染色琼脂糖电泳，进行判定来实现。

9. 根据权利要求5所述的鸡传染性贫血病毒LAMP检测方法，其特征在于靶基因扩增产物是通过或加入Mg²⁺，检测副产物焦磷酸镁沉淀的浊度，进行判定来实现。