[发明专利]一种可高效高特异灭杀乳腺癌细胞的药物

说明书

技术领域：

本发明属于医药生物领域，具体涉及一种可高效高特异灭杀乳腺癌细胞治疗载体及其药物。

背景技术：

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，发病率逐年增高，严重危害了身体健康。乳腺癌手术治疗主要针对早中期乳腺癌，术后和晚期一般需综合治疗。化放疗不能杀灭乳腺癌干细胞，导致复发转移。综合治疗后，预后仍不满意，中晚期患者5年生存率仅10％-30％。三阴乳腺癌预后更差。乳腺癌干细胞是乳腺癌复发、转移和耐药的主要原因。因此，迫切需要探索高效靶向杀灭乳腺癌的新药物。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种高效靶向乳腺癌BCL-2靶点，可高效高特异灭杀乳腺癌细胞的T-VISA-BikDD治疗载体。

本发明克隆端粒酶启动子hTERT，长度为418bp，具有肿瘤细胞特异性，但其活性在肿瘤细胞中不到CMV启动子活性的1％，因此无法广泛应用，本发明首先将hTERT启动子控制Gal4-VP2(两个拷贝的VP16，具有强烈的转录激活特性)融合蛋白基因；再将Gal4-VP2融合蛋白与Gal4效应元件G5E4T结合，启动靶基因或目的基因的大量转录；然后将WPRE位于目的基因的3-UTR，增强mRNA稳定性的作用，由此构建得到hTERT-VP16-GAL4-WPRE(VP16-GAL4-WPRE Integrated Systemic Amplifier，VISA，整合性系统放大器)调控系统，简称为T-VISA(整合性系统放大器)系统，最后，结合BiKDD基因(突变的Bik自杀基因，与Bcl-2结合，释放Bad和Bax，导致细胞凋亡)作为治疗基因，建立T-VISA-BiKDD治疗载体，该T-VISA-BiKDD治疗载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供一种可高效高特异灭杀乳腺癌细胞的药物T-VISA-BikDD脂质体，其特征在于，包括脂质体和被脂质体包被的T-VISA-BiKDD治疗载体，所述的T-VISA-BiKDD治疗载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的脂质体可以使用按照常规方法制备的脂质体，优选是通过以下方法制备的脂质体：按照1摩尔胆固醇对应1.7摩尔磷脂酰胆碱的比例，秤取磷脂酰胆碱与胆固醇，用磷脂酰胆碱质量1/4的氯仿作为溶剂溶解磷脂酰胆碱与胆固醇，将上述溶液置于旋转烧瓶中，旋转烧瓶使其混合均匀，再用真空抽吸器吸干溶剂，得到一层附着在烧瓶壁上的脂膜；然后再用按8.9/100ml/g磷脂酰胆碱的量加入质量分数为5％的葡萄糖溶液溶解已干燥的脂膜，旋转真空干燥，然后再加入双蒸水至上述质量分数为5％的葡萄糖溶液的体积，在50℃的超声水浴箱中进行超声处理1min，再在50℃下收集通过0.1μm的聚碳酸酯膜滤膜的脂质体。通过该方法制备的脂质体粒径为180nm左右，容许其穿透肿瘤细胞中极细的毛细血管并被细胞摄取。

所述的药物T-VISA-BikDD脂质体优选通过以下方法制备的，将上述脂质体加入到5％的葡萄糖溶液中使脂质体的浓度为8mM，将T-VISA-BiKDD治疗载体加入到5％的葡萄糖溶液中使T-VISA-BiKDD治疗载体的浓度为1μg/μl，然后将脂质体溶液和T-VISA-BiKDD治疗载体溶液混合静置20min，由此得到药物T-VISA-BikDD脂质体。利用该方法制备得到的药物T-VISA-BikDD脂质体的粒径200～300nm，稳定性好，在4～8℃，1-2年无降解。

本发明的药物T-VISA-BikDD脂质体在体外能高效杀灭一般乳腺癌细胞、三阴乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞细胞系，而对正常细胞无杀灭作用，在动物模型中可抑制乳腺癌细胞的生长，延长小鼠的生存时间，对小鼠行为无明显影响，无死亡发生，无肝肾毒性。

由此可见，本发明的T-VISA-BikDD治疗载体经脂质体包裹输送后，在乳腺癌部位富集，可高效靶向乳腺癌BCL-2靶点，与Bcl-2结合，释放Bad和Bax，导致乳腺癌细胞凋亡，而对正常细胞无灭杀作用，可全身给药，基因表达量高、时间长、效率高，药效确切，毒副作用低，无肝肾毒性，在治疗乳腺癌的具有广阔的前景。

附图说明：

图1是T-VISA-BikDD结构示意图，它是以pUK-21为基本骨架，kana抗性的可治疗性载体；