[发明专利]海葵强心肽及其提取方法和应用

权利要求书

1.一种海葵强心肽，其特征在于具有如下氨基酸序列：

1     6     11    16    21    26    31    36    41    46

GGVPC LCDSD GPSVR GNTLS GIIWL RGCPS GWHNC KAHGP TIGWC CKQ。

2.根据权利要求1所述的海葵强心肽，其特征在于该氨基酸序列中包含6个半胱氨酸，形成三对二硫键，二硫键连接方式分别为I-V、II-IV和III-VI；所述强心肽的分子量为5018.2Da。

3.根据权利要求2所述的海葵强心肽，其特征在于该强心肽空间结构包含三段反平行β-折叠片，分别为3-5号，21-24号以及46-47号氨基酸残基构成的肽段；由三段反平行β-折叠片连接分子中的两个大的环，分别为6-20号以及25-45号氨基酸残基所在肽段。

4.权利要求1～3中任意一种海葵强心肽的提取方法，其特征在于包括如下步骤：

①采用丙酮分级沉淀法对海葵粗毒液进行初步抽提；

②将初步抽提样品以去离子水溶解，过滤后，上样反相高效液相色谱进行分离，首先，采用半制备型C8反相柱样品进行分离，收集主峰，冷冻干燥；

③利用分析型C18反相柱进行精细分离，获得所需的强心肽。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于所述的海葵粗毒液采用反复冻融法从海葵中提取。

6.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于步骤①如下：丙酮事先在-20℃条件下进行预冷，之后在海葵粗毒液中分别加入20％，50％，80％的丙酮进行分级沉淀，得到初步提取样品。

7.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于步骤②中半制备型C8反相柱样品进行分离过程如下：采用XBridgeTM C8半制备型反相柱，洗脱液分别为含0.1％TFA的水以及含0.1％TFA的乙腈；采用线性梯度洗脱，30分钟内乙腈浓度由5％上升到45％；流速为2.5ml/min收集紫外吸收值最高的主峰。

8.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于步骤③如下：采用反相色谱柱为218TP54C18，洗脱液分别为含0.1％TFA的水和乙腈；采用线性梯度洗脱，50min内，乙腈浓度从20％上升到40％，流速为1ml/min，收集紫外吸收值最高的主峰，经冷冻干燥后备用。

9.权利要求1～3中任意一种海葵强心肽在制备心血管疾病药物中的应用。

10.权利要求1～3中任意一种海葵强心肽在制备心力衰减或心律失常疾病药物中的应用。