[发明专利]类人胶原蛋白及类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质工程、生物医用材料领域，具体涉及类人胶原蛋白、类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶及其制备方法。

背景技术

整形美容行业正随着人们生活水平的不断提高而快速发展，隆胸、隆鼻、除皱、脸部整形等都受人追捧。目前面部整形的需求包括：祛除皱纹，改善面部轮廓，填平凹陷瘢痕或唇部，修复受伤的组织等。因此，软组织填充材料市场需求量大。

在19世纪90年代至今，人们先后研究了白蜡、脂肪移植、硅树脂、凝胶植入体等材料用于软组织整形，临床应用发现：都存在着硬化，瘤状肿块、吸收过快、慢性炎症等问题。近些年来，美国FDA相继批准了几个用于软组织填充的产品，其主要成分为牛胶原、透明质酸钠、PMMA小球等，已经有了较好的效果，对于部分使用者仍然存在着使用部位红肿、过敏及降解过快等情况。

胶原蛋白，又称为胶原，是脊椎动物体内含量最丰富、分布最广泛的一组硬蛋白，是脊椎动物身体结构的重要材料，也是在哺乳动物中含量最丰富的蛋白。胶原由多糖蛋白分子组成，是结缔组织的主要蛋白成分，占机体总蛋白的20～30％。机体中大约一半的胶原蛋白存在于皮肤中，胶原蛋白占真皮和筋腱干重的70％，相当于体重的6％。类人胶原蛋白是将人体已知序列胶原蛋白的一段mRNA逆转录生成cDNA后，经过特定序列重复和修饰，转化于大肠杆菌中，并经过高密度发酵、分离提取及纯化而得，由西安巨子生物基因技术股份有限公司发明并独家生产。它从根本上解决了动物提取胶原蛋白的水不溶性和病毒隐患(疯牛病、猪瘟疫、禽流感)等问题，并且具有良好的生物学特性和功能，促新细胞形成和促上皮细胞、成纤维细胞生长功能相比动物体提取胶原蛋白优良，免疫排异反应低。

透明质酸钠是广泛存在于动物和人体的生理活性物质，在人皮肤、关节滑膜液、脐带、房水及眼玻璃体中均有分布。其溶液具有高黏弹性及仿形性，是目前公认的生物相容性极好的生物医用材料，为眼科手术的辅助剂，并有保护角膜内皮细胞及眼内组织，减少手术并发症，促进伤口愈合的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶及其制备方法，该方法工艺简单，所制备的类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶机械性能良好、生物相容性优异，降解时间与目前市场上同类产品相比大大延长，彻底杜绝了动物胶源材料存在的病毒隐患，保证了材料的安全性。

本发明人经过深入研究发现：单纯使用透明质酸钠制备温敏型水凝胶存在着降解速度过快，机械轻度过低的问题，不能完全满足临床要求，我们在透明质酸钠的基础上引入了类人胶原蛋白来改善单纯透明质酸钠凝胶降解过快的问题，经过反复复合试验，得到了理想的温敏型水凝胶，从而完成了本发明。

即，本发明如下：

1.一种重组胶原蛋白，其由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成。

2.编码项1所述的重组胶原蛋白的核酸。

3.导入了项2所述的核酸的载体。

4.用项3的载体转化宿主细胞而得到的转化体。

5.一种类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将类人胶原蛋白用注射用水溶解成质量分数为1.0％～5.0％的溶液；

2)将医用透明质酸钠用注射用水溶解成质量分数为1.0％～2.0％的溶液；

3)将β-甘油磷酸钠用注射用水溶解为20％～50％的溶液；

4)将上述三种溶液按一定比例混合后，在0℃～15℃条件下搅拌10～30分钟混合均匀，并同时将pH调整至7.0～7.4；

5)将上述混合液在无菌条件下灌装在一次性玻璃注射器中，即为成品。

6.根据项5所述的类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶的制备方法，其特征在于：所述类人胶原蛋白是项1所述的重组胶原蛋白。

7.根据项5所述的类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶的制备方法，其特征在于：所述透明质酸钠的分子量为100万～250万。

8.根据项5所述的类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶的制备方法，其特征在于：类人胶原蛋白溶液、透明质酸钠溶液及β-甘油磷酸钠混合过程中体积比为(1～3)∶(1～5)∶(1～2)。

9.根据项5所述的类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶的制备方法，其特征在于：类人胶原蛋白溶液、透明质酸钠溶液及β-甘油磷酸钠混合过程溶液的温度维持在0℃～15℃。

10.根据项5所述的类人胶原蛋白复合透明质酸钠水凝胶的制备方法，其中，成品溶液的pH值的调节依赖于β-甘油磷酸钠添加量。