[发明专利]用于免疫治疗的基于酵母的疫苗

说明书

本申请是中国申请200380109787.5的分案申请，该母案的国际申请日为2003年12月6日，本分案采用了与该母案一致的发明名称。

技术领域

本发明涉及含有异源抗原的基于酵母的疫苗在诱发体液免疫和细胞免疫，和一方面预防和治疗多种动物癌症中的用途。

背景技术

导致新的、异常生长的瘤形成或快速细胞增殖过程是许多疾病的特征，这些疾病可能是严重的，并且有时是威胁生命的。通常，细胞和组织的瘤性生长以高于细胞的正常增殖为特征，其中即使诱发(instigating)因子(例如，肿瘤启动子，致癌原，病毒)不再存在之后，细胞仍然继续生长。细胞生长往往显示出结构上缺乏组织和/或缺乏与正常组织的协调，并且通常产生一团可能是良性或恶性的组织(例如，肿瘤)。恶性细胞生长，或恶性肿瘤是世界范围内死亡的最主要的原因，研发肿瘤性疾病的有效治疗方法是大体研究的课题。虽然已经提出了多种治疗和预防癌症的创新方法，很多癌症仍然具有高死亡率，并且可能难以治疗或者对于常规疗法相对无反应。

例如，肺癌是美国第二种最普遍的癌症形式，占全部癌症的15％和全部癌症死亡数的28％。2002年，估计将诊断出177,000例肺癌新增病例，166,000人将死亡，死亡率高于结肠直肠癌、前列腺癌和乳腺癌的总和。80％的原发性肺部肿瘤是非小细胞肺癌(NSCLC)。由于多种药物治疗产生最小存活优势和严重毒性，标准化疗联合仍然是相对无效的。

另有一例，多形性成胶质细胞瘤(神经胶质瘤)是成年人中最普遍的原发恶性脑肿瘤。尽管应用了外科手术，放疗和化疗，治愈率和平均患者存活数仍没有改善。其它肿瘤也向脑部转移，这种情况下，由于血脑屏障对药物传递的限制使它们对外周化疗的反应不太好。明确地说，需要更多的针对脑肿瘤的治疗方法。这种方法的其中之一包括免疫疗法。一段时间以来已知在外周致敏了的淋巴细胞能通过血脑屏障并靶向脑组织。脑肿瘤免疫疗法的主要靶点是诱发针对在脑肿瘤细胞中特异性表达的新的或突变的抗原的免疫反应的疫苗。这个目标将提供一种疫苗方法，以提供广泛的、有力的和长效的免疫保护作用对抗颅内肿瘤。

疫苗广泛地用于预防疾病和治疗确定的疾病(免疫治疗疫苗)。蛋白抗原(例如，由于重组DNA技术使其研制成为可能的亚单位疫苗)，当不与佐剂一起给予时，诱发弱体液(抗体)免疫，并因此到目前为止是令人失望的，因为它们仅产生有限的免疫原性。亚单位疫苗与灭活病毒和重组活病毒疫苗的另一个缺点是当与佐剂一起给予时，虽然刺激强体液免疫反应，但不能诱发保护性细胞免疫。佐剂实验性地用来刺激小鼠的有效免疫反应，并且希望用于人疫苗，但只有少数佐剂被批准用于人类应用。实际上，在美国批准使用的唯一佐剂是铝盐，氢氧化铝和磷酸铝，它们中没有一个刺激细胞介导的免疫。铝盐制剂不能冷冻或冻干，并且这种佐剂不是与所有抗原都有效。另外，多数佐剂不会导致细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的诱导。CTL是杀死合成异常蛋白，包括病毒蛋白和突变“自身”蛋白的细胞所需的。正在大力研究刺激CTL的疫苗以用于对抗多种疾病，包括所有癌症(例如黑色素瘤，前列腺癌，卵巢癌等)。因此总之需要总体刺激CTL和细胞介导免疫的佐剂。

酵母已用于亚单位蛋白疫苗的产生；然而，在这种情况中，酵母用于产生蛋白，但是酵母细胞或其亚细胞级分实际上不能传递给患者。也有在免疫之前用酵母喂饲动物，试图以非特异性方式启动免疫反应(例如，刺激吞噬作用以及补体和干扰素的产生)。结论是不明确的，并且这种方法不能产生保护性细胞免疫；参见例如Fattal-German等，1992，Dev.Biol.Stand.77，115-120；Bizzini等，1990，FEMSMicrobiol.Immunol.2，155-167。

1998年11月3日公布的Duke等人的美国专利US 5,830,463，描述了使用带有至少一个能调节免疫反应的化合物的非致病性酵母，并证明了这种复合物对刺激细胞介导的免疫和刺激体液免疫都有效。具体的，US 5,830,463证明了当给予动物后，经遗传改造表达异源抗原的酵母能诱发细胞介导的免疫反应和体液免疫反应。

尽管癌症治疗和疫苗技术目前有进展，仍然急迫需要研制安全和有效的疫苗和佐剂，它们是针对适用于免疫疗法的疾病，包括瘤性转化(癌)导致的疾病，特别是针对那些对使用常规癌症疗法和普通疫苗策略的治疗特别耐受的癌症。

发明概述