[发明专利]一种禽用油乳剂疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗及其制备方法，尤其是一种禽用油乳剂疫苗及其通过罐体恒流乳化的制备方法。

背景技术

油乳剂灭活疫苗是兽用生物制品中的一种常用剂型，以其免疫刺激持续、免疫保护期长的特点在疫苗的应用方面有着不可替代的作用，但油乳剂灭活疫苗在制作过程中由于工艺配方、温度差异等因素的影响，往往造成油乳剂灭活疫苗的不稳定，影响了灭活疫苗的实际应用。

由于油乳剂疫苗具有较大的油水界面，属于热力学不稳定体系。其不稳定性主要表现有分层、破裂、转型和败坏，以分层、破裂最为常见，是疫苗生产者长期存在的一个难题。佐剂制作和乳化过程的不合理，或破乳后再乳化，均难以保证乳化效果。

生产免疫性好、安全性高、易于使用、保存期长的油乳剂疫苗，需要控制合理的工艺流程和技术参数。油包水型油乳剂疫苗通常是将油相和水相(毒液)在乳化剂的作用下，均质乳化，形成稳定的油包水型乳化体系。

通常油乳剂疫苗的制备方法如下：将生产用毒种用磷酸盐缓冲溶液或生理盐水稀释一定倍数，接种于易感鸡胚中，收获胚液，浓缩灭活作为水相，水相油相按比例进行乳化，制成一种安全、稳定、高效的灭活疫苗。

影响油乳剂疫苗性状的因素主要有，油相水相比例、乳化剂种类和比例以及乳化条件，而这三者之间是相互影响的。

一、油相水相比例。油包水剂型的油乳剂疫苗水相为分散性，水相比例大会使分散相液滴的界面膜不稳定，容易出现破乳或转型，影响疫苗的保存时间，而水相比例过小，会增加疫苗粘度，造成注射困难，不利于临床应用。

二、乳化剂和助乳化剂的种类和比例。乳化剂均为表面活性剂，可降低乳化后形成内向液滴而产生的自由能；助乳化剂可使油水两相之间形成稳定的界面膜，并有增粘、悬浮的作用。所以乳化剂选用比例不但影响疫苗性状，而且影响疫苗的效价。

三、乳化工艺条件。分为乳化时间、温度和乳化剪切速度。

在开始阶段，搅拌促使小液滴的形成，继续搅拌增加小液滴碰撞机会，持续过久搅拌，分散的小液滴会合并增大，甚至完全破乳；适宜的乳化温度，乳液粘度适中，界面膜不易发生破裂，又有利于乳化剂水化作用；适中的剪切速度可以使油水相充分混合，剪切速度过高会将气泡带入体系，形成三相体系，使乳剂不稳定。选择适当的剪切速度，使分散相液滴的大小和均匀度与乳化剂的比例相适应，使疫苗性状稳定，粘度适宜，保存时间长，易于注射。

此外，粘度对乳剂稳定性的影响也不容忽略，通常粘度大的体系不容易分层，破裂，但是对于疫苗注射剂而言，粘度不宜太大，否则会给注射带来不便，同时会引起动物的过激反应。因此要设法使较低粘度的乳液保持很好的粘度。

油乳剂灭活疫苗的稳定性通过离心法(3000r/min离心15min)、定时保存法(2-8℃放置1年不分层)、抗老化试验(37℃放置21天不分层)来检测。事实上离心法检测不分层的乳液，2-8℃定时保存检测常有分层的现象。

油乳剂疫苗的稳定性一直以来就是疫苗生产的难题，由于乳化不均匀，致使乳液的稳定性不好，2-8℃极易分层，直接影响产品的质量和效价。

常用的乳化技术一是使用胶体磨，主要是通过转速和齿间距来控制分散相液滴的半径，胶体磨使用时调节麻烦，规模小，不易实现自动控制，而且多为敞开式非管线式操作，不适于工业化的无菌生产。二是采取罐内的均质机进行乳化，这种均质机适用于实验室研究和小规模的生产，对于产业化时需要乳化量较大的情况，会出现局部剪切过度，导致体系破坏，很难达到均匀的乳化效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种能应用于罐体批量生产的禽用油乳剂疫苗及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种禽用油乳剂疫苗，包括油相、水相，水相组成为浓缩的疫苗抗原、亲水性表面活性剂，油相组成为白油、亲油性表面活性剂、助乳化剂。

所述浓缩的疫苗抗原为灭活的禽类病毒微生物，包括新城疫病毒、禽流感病毒、支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、法氏囊病毒中的一种或任意几种病毒的混合物。

所述油乳剂疫苗的水油体积比为1∶1.5-1∶4(V/V)。

所述亲水性表面活性剂选自吐温80，用量为依水相比例而定，占水相体积总量的4％-6％。

所述油乳剂疫苗水油比例为1∶2(V/V)，吐温80用量为5％(V/V)。

所述亲油性表面活性剂选自司盘80、司盘85中的一种，助乳化剂选自硬脂酸铝。

所述油相的白油、亲油性表面活性剂、助乳化剂重量配比为94∶6∶2。