[发明专利]硫酸软骨素酶AC融合蛋白、其编码基因以及其构建方法

说明书

技术领域

本文涉及基因工程和发酵工程领域中一种硫酸软骨素酶AC融合蛋白及其编码基因以及其构建方法。此外本文还提供了纯化硫酸软骨素酶AC融合蛋白的方法。另外，本文还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素A或C的方法。

背景技术

硫酸软骨素裂解酶(chondroitinase或chondroitin sulfateyase，以下有时也简称为“ChSase”)是一类能将硫酸软骨素、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖(ΔDi及寡糖)的裂解酶。

随着对ChSase的深入研究，发现硫酸软骨素酶AC(以下有时也简称为“ChSase AC”)有着广泛的应用价值：在基础理论研究方面，科研人员利用ChSase AC特异性地降解硫酸软骨素蛋白聚糖中的硫酸软骨素侧链，通过对机体组织特定部位的硫酸软骨素的降解，并通过该部位硫酸软骨素降解前后功能的改变及降解产物的分析，来了解硫酸软骨素裂解酶的功能与结果(参见：Shibata S，Midura RJ，Hascall UC.Structural analysis of the linkage regionoligosaccharides and unsaturated disaccharides from chondroitin sulfate usingCarbopac PA.J Biol Chem，1992，267(10)：6548-6555；和Hardingham TE，Fosang AJ，Hey NJ等人，The sulphation pattern in chondroitin sulphate chainsinvestigated by chondroitinase ABC and ACII digestion and reactivity withmonoclonal antibodies.Carbohydr Res 1994，255(3)：241-254)。

在ChSase AC的临床运用领域，近年来研究也非常活跃，包括对细胞外基质代谢相关疾病，如椎间盘突出的研究。在治疗椎间盘突出的介入疗法中，将化学药物注入椎间盘内以溶解吸收椎间盘中压迫神经的髓核或破裂的纤维环以解除对神经的压迫。目前临床上主要使用的化学药物成分为木瓜蛋白酶和羧肽酶等，但此类药物成分的特异性低，并损伤外周组织，从而易引起髓神经麻痹等症。近年来，Mark R Brown等(参见：Brown MD.Method fortreating intervertebral disc displacement with enzymes.US：4,696,816，1987-09-29)经研究发现，突出椎间盘内的主要组分为蛋白聚糖，而用ChSaseAC则可特异性降解掉突出的椎管内的糖胺聚糖、降低椎管内压，同时对椎管外周组织无损害。因此，ChSase AC木瓜蛋白酶更适宜治疗椎间盘突出，同时具有更高的安全性(参见：Kato F，Mimatsu K，Iwata H等人，Comparisonof tissue reaction with chondroitinase ABC and chymopapain in rabbits as thebasis of clinical application in chemonucleolysis.Clin Orthop，1993，288(3)：294-302)。