[发明专利]硫酸软骨素酶B融合蛋白、其编码基因以及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和发酵工程领域中一种硫酸软骨素酶B融合蛋白及其编码基因以及其构建方法。此外本文还提供一种纯化硫酸软骨素酶B融合蛋白的方法。另外，本文还涉及一种生产低分子量硫酸软骨素B的方法。

背景技术

硫酸软骨素裂解酶(chondroitinase或chondroitin sulfaeyase，以下有时也简称为“ChSase”)是一类能将硫酸软骨素、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖(ΔDi及寡糖的裂解酶。近年来，ChSase作为一种研究机体蛋白聚糖的结构与功能的工具以及作为一种新型药用酶而日益受到人们的重视。硫酸软骨素酶B(以下有时也简称为“ChSase B”)可特异性降解硫酸皮肤素及透明质酸为ΔDi-0s及寡糖。

因ChSase B仅特异性降解硫酸皮肤素(也称为硫酸软骨素B)及透明质酸，所以对该酶的药用价值的研究比较另一种硫酸软骨素酶AC(以下有时也简称为“ChSase AC”)要少一些，但随着研究的深入，发现ChSase B也有着不可忽视的应用价值：在基础理论方面，利用ChSase B可特异性的降解硫酸软骨素蛋白聚糖中硫酸软骨素侧链，许多科研人员通过对机体组织特定部位的硫酸软骨素的降解，并通过该部位硫酸软骨素降解前后功能的改变及降解产物的分析，来了解硫酸软骨素的结果与功能(参见：Shibata S，Midura RJ，Hascall UC.Structural analysis of the linkage region oligosaccharides and unsaturated disaccharides from chondroitin sulfate using Carbopac PA.J Biol Chem，1992，267(10)：6548-6555)。

在临床运用领域，近年来研究非常活跃，研究表明，硫酸软骨素糖胺聚糖与肿瘤细胞的侵入、转移密切相关(参见：Henke CA，Roongta V，Mickelson DJ，et al.CD44-related chondroitin sulfate proteoglycan，a cell surface receptor implicated with tumor cell invasion，mediates endothelial cell migration on fibrinogen and invasion into a fibrin matrix.J Clin Invest，1996，97(11)：2541-2552)。2001年Denholm EM等发现ChSase B能抑制黑色素瘤血管的形成及瘤细胞的转移与增生等(参见：Denholm EM，Lin YQ，Silver PJ.Anti-tumor activities of chondroitinase AC and chondroitinase B：inhibition of angiogenesis，proliferation and invasion.Eur J Pharmacol，2001，416(3)：213-221)。

在制药领域，硫酸软骨素是一种具有较强的降血脂作用和缓冲抗凝血作用的物质，临床上主要用于防止冠心病和动脉粥样硬化。目前，对低分子量硫酸软骨素的制备常采用酸水解法、离子交换法和酶解法。前两种方法需要较复杂的实验设备并且会污染环境，比较而言，酶解法需要的条件不高且容易控制，因而具备较大的优势。酶解法的关键在于获得大量的硫酸软骨素裂解酶，其中包括ChSase B的获得。