[发明专利]一种柿叶提取物及其制剂的HPLC分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种柿叶提取物及其制剂的成分的分析技术领域，特别是涉及利用高效液相色谱法进行的一种柿叶提取物及其制剂的HPLC分析方法。

背景技术

柿叶为柿科植物柿树的干燥叶，柿叶主要含黄酮类、有机酸和三萜等成分。柿叶具有抗菌消炎、清热解毒、抗氧化、软化血管等作用，因而可以作为药物来利用。由于柿叶具有上述的药效，因而，在现有技术中，柿叶的提取得到多方研究.柿叶提取物，是指经法定工艺制得的中间提取物，其工艺路线为：

取干柿叶，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.12～1.15(60℃)，加乙醇至含醇量达85％，静置过夜，滤取上清液，备用；沉淀物用65％乙醇洗涤两次，合并洗涤液，静置过夜，滤取上清液，与备用上清液合并，回收乙醇，加入适量的水，混匀，滤过，滤液用乙酸乙酯提取四次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯并浓缩成稠膏，低温干燥，即得。

柿叶提取物目前主要用于制备脑心清片、脑心清胶囊、脑心清滴丸和脑心清分散片等一些制剂，由于不用产地、不同气候及提取工艺会影响柿叶提取物有效成分含量，从而影响柿叶提取物的质量，而柿叶提取物的质量又决定了脑心清片、脑心清滴丸等制剂的质量好坏，所以，需要对柿叶提取物及其制剂的主要成分进行分析，考察柿叶提取物及其制剂质量好坏及各批次产品之间的质量差异。在现有技术中，仅存在对不同产地柿叶进行质量分析的方法，具体为：称取柿叶粉末约5g，置于索氏提取器中，加入200mL石油醚，80℃回流5h，用于脱脂及除叶绿素。精密称取脱脂柿叶粉末1.0g于25mL具塞锥形瓶中，加入10.00mL甲醇-水(75∶25)的提取溶液，密塞后称重。超声提取40min，放冷，称重，甲醇补足减失重量。摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液进样。精密吸取供试品溶液10μl进样，采用以下色谱条件进行洗脱：Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)和保护柱；检测波长360nm；柱温为室温；流速0.8mL·min-1；进样量20μL。流动相为乙腈-10mmol·L-1KH2PO4溶液，二元梯度洗脱，0～20min，13％乙腈，20～45min，20％乙腈，45～60min，60％乙腈，60～70min，100％乙腈。

上述的现有技术存在如下缺点：

1、现有技术主要是对不同产地的柿叶药材进行指纹图谱分析，考察不同产地柿叶的质量稳定性；

2、现有技术所得的指纹图谱中含有12个特征色谱峰，只对其中的2个进行了指认，反映的信息量小。

所以到目前为止，仍无较好的方法来全面分析柿叶提取物及其制剂中主要化学成分以及考察它们的质量稳定性。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种柿叶提取物及其制剂的HPLC分析方法，对柿叶提取物及其制剂的主要成分进行综合分析，对不同批次的柿叶提取物及其制剂的指纹图谱相进行测试，建立柿叶提取物及其制剂的HPLC对照指纹图谱，通过测试柿叶提取物及其制剂样品的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度，来鉴别柿叶提取物及其制剂质量的优劣程度，达到控制柿叶提取物及其制剂质量的目的。

为了解决上述问题，本发明是采用如下技术解决方案来实现上述目的：

一种柿叶提取物及其制剂的HPLC分析方法，包括如下步骤：

1)称取至少十个柿叶提取物样品或柿叶提取物制剂粉末样品，分别与乙醇或甲醇混合、过滤，得到各样品的供试品溶液；

2)而后利用HPLC进行分析，得到各样品的HPLC指纹图谱，根据各样品的HPLC指纹图谱建立柿叶提取物或柿叶提取物制剂的HPLC对照指纹图谱；其中，HPLC的色谱条件流动相设定如下：乙腈-磷酸溶液，二元梯度洗脱：洗脱时间为9～11min，浓度从13％～15％变化至17％～19％的乙腈；洗脱时间为14～16min，浓度为17％～19％的乙腈；洗脱时间为19～21min，浓度从17％～19％变化至29％～31％的乙腈；洗脱时间为14～16min，浓度从29％～31％变化至49％～51％的乙腈；

3)将待测样品与甲醇或乙醇混合、过滤，得到待测样品的供试品溶液，而后用HPLC按步骤2)中的色谱条件进行分析，得到该待测样品的HPLC指纹图谱，将该指纹图谱与相应的HPLC对照指纹图谱进行比较。

优选地，过滤采用微孔滤膜进行。

优选地，所述微孔滤膜的孔径为0.35μm～0.45μm。

优选地，将柿叶提取物制剂去除外壳后碾成粉末，制成柿叶提取物制剂粉末样品。