[发明专利]辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用。

背景技术

书虱(booklice)又名纸虱、米虱，隶属于啮目(Psocoptera)、书虱科(Liposcelidiae)、书虱属(Liposcelis)，是世界储粮保护中的常见害虫。书虱属害虫个体微小(成虫体长约1mm)，活动能力强，可随储粮调运及人为携带远距离传播，极易建立种群，抗性强而防治难度大，严重危害储粮安全。随着国际贸易及储粮调运的日益频繁，储粮害虫传播扩散风险日益增大。啮书虱L.corrodens(Heymons)在国外广泛分布，而在我国尚未见发生报道，存在较大的入侵风险。

书虱属(Liposcelis)包括如下种：啮书虱(L.corrodens)、无色书虱(L.decolor)、小眼书虱(L.paeta)、嗜卷书虱(L.bostrychophila)、嗜虫书虱(L.entomophila)、暗褐书虱(L.brunnea)、虚伪书虱(L.mendax)、三色书虱(L.tricolor)、红书虱(L.rufa)和皮氏书虱(L.pearmani)等。

传统的书虱种类鉴定多以成虫形态特征为依据，由于书虱个体微小，形态鉴定对专业技术要求很高，存在耗时长且难度大的缺陷。尤其对于非成虫发育阶段的个体(如卵、幼虫和蛹)，形态鉴定难以做到。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定啮书虱的特异引物对及其应用。

本发明提供的辅助鉴定啮书虱(L.corrodens)的特异引物对，由序列表的序列1所示DNA(上游引物)和序列表的序列2所示DNA(下游引物)组成。

所述特异引物对可用于辅助鉴定啮书虱。

所述特异引物对可用于制备辅助鉴定啮书虱的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定啮书虱的试剂盒，包括所述特异引物对。

本发明还保护一种辅助鉴定啮书虱的方法，包括如下步骤：以待测书虱的基因组DNA(或所述基因组DNA的稀释液)为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到PCR扩增产物待测书虱为候选的啮书虱，如果没有得到PCR扩增产物待测书虱为候选的非啮书虱。

所述PCR扩增产物的大小具体可为243bp。

所述PCR扩增的反应体系具体可为(26ul)：2×Taq PCR Master Mix 13ul，所述上游引物(10uM)0.5ul，所述下游引物(10uM)0.5ul，所述基因组DNA 2ul，ddH₂O10ul。

所述PCR扩增的反应体系具体还可为(26ul)：2×Taq PCR Master Mix 13ul，所述上游引物(10uM)0.5ul，所述下游引物(10uM)0.5ul，所述基因组DNA的稀释液1ul，ddH₂O 11ul。

所述PCR扩增的反应参数具体可为：95℃预变性3min；95℃变性30sec、50℃退火40sec、72℃延伸1min，32个循环；72℃8min。

所述待测书虱可为书虱属书虱，如啮书虱(L.corrodens)、无色书虱(L.decolor)、小眼书虱(L.paeta)、嗜卷书虱(L.bostrychophila)、嗜虫书虱(L.entomophila)、暗褐书虱(L.brunnea)、虚伪书虱(L.mendax)、三色书虱(L.tricolor)、红书虱(L.rufa)或皮氏书虱(L.pearmani)。

本发明还保护一种从书虱中辅助鉴别啮书虱的方法，包括如下步骤：以待测书虱的基因组DNA为模板，用所述特异引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物的待测书虱为候选的啮书虱。

所述PCR扩增产物的大小具体可为243bp。

所述PCR扩增的反应体系具体可为(26ul)：2×Taq PCR Master Mix 13ul，所述上游引物(10uM)0.5ul，所述下游引物(10uM)0.5ul，所述基因组DNA 2ul，ddH₂O10ul。

所述PCR扩增的反应体系具体还可为(26ul)：2×Taq PCR Master Mix 13ul，所述上游引物(10uM)0.5ul，所述下游引物(10uM)0.5ul，所述基因组DNA的稀释液1ul，ddH₂O 11ul。

所述PCR扩增的反应参数具体可为：95℃预变性3min；95℃变性30sec、50℃退火40sec、72℃延伸1min，32个循环；72℃8min。