[发明专利]蝙蝠蛾幼虫内源加压人工感染中国被毛孢培养虫草的方法

说明书

技术领域

    本发明属冬虫夏草的人工培养技术领域，具体为冬虫夏草培育过程中蝙蝠蛾幼虫内源加压人工感染中国被毛孢的方法。

背景技术

冬虫夏草是一种十分名贵的药用真菌，它是昆虫蝙蝠蛾幼虫感染中国被毛孢（Hirsutalla sinensis）后，形成的蝙蝠蛾幼虫的真菌感染体。受该真菌感染的蝙蝠蛾幼虫，因感染后体内长满该真菌而死亡，之后在特殊环境条件下，从蝙蝠蛾死后幼虫体上长出的“草”是真菌中国被毛孢的子实体—子座。

真菌中国被毛孢在分类学上属子囊菌亚门Ascomycotina，核菌纲Pyrenomycetes，麦角菌目Clavicipitales。也有许多文献资料将中国被毛孢用于虫菌感染复合体冬虫夏草。中国被毛孢已被人工从冬虫夏草虫体上分离并广泛培养。真菌中国被毛孢的培养方法及菌株生物学等研究工作已有大量报道。

现在人工培养冬虫夏草的报道较多。蛹虫草又称北冬虫夏草，是蛹草菌(Cordyceps militaris)寄生在夜蛾科等昆虫的蛹上。蛹虫草与冬虫夏草不仅感染的对象不同，真菌的种类差别也大。在冬虫夏草人工培养方面，多数是中国被毛孢培养的报道。对蝙蝠蛾幼虫人工感染方法及之后的特殊环境培养子实体的报道较少。蝙蝠蛾幼虫人工感染是人工培养冬虫夏草过程的关键环节。只有蝙蝠蛾幼虫感染中国被毛孢后，才可能进一步在特殊的环境条件下培养，让感染体长出子实体—子座。现已公开的感染方法有两种，一是用真菌中国被毛孢的孢子喷洒于幼虫体表，孢子萌发后有可能感染蝙蝠蛾幼虫；二是让蝙蝠蛾幼虫在大量培养真菌中国被毛孢的环境中生活，让其自然感染。上述两种方法随机性大，感染率很低，周期长，成本高，有失商业或人工大规模培养的意义。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述缺点，为冬虫夏草的人工培养提供一种具有商业价值的方法，即蝙蝠蛾幼虫内源加压人工感染中国被毛孢培养虫草的方法。

本发明方法包括以下步骤：

1、制作无菌感染原液，将以下重量比的成分混合：

家蚕蛹28～34%，

马铃薯5～7%，

硫酸镁0.008~0.01%，

磷酸二氢钾0.035~0.05%，

余量为水，

经煮沸，过滤，灭菌制成无菌感染原液。

制作无菌感染原液的最佳方法是：家蚕蛹500克+马铃薯100克+硫酸镁0.15克+磷酸二氢钾0.7克+水1000克，煮沸时间大于30分钟，用25～28号绢网过滤，滤液如果少于500毫升，用蒸馏水定容至500毫升，滤液如果大于500毫升，将滤液加热浓缩至500毫升，滤液经灭菌后制成无菌感染原液。

2、制作感染源菌液，采用中国被毛孢为感染菌源，用接种针挑离其纯菌丝体放于无菌感染原液中，放入量为每5毫升无菌感染原液中放入10～15针所挑离的中国被毛孢，研磨后制成感染源菌液。

真菌中国被毛孢的培养方法为已有技术。取真菌的纯菌丝体放于液体中的操作过程为本专业人员所知晓。

最好是从长满中国被毛孢的培养瓶壁上，挑离纯菌丝体于无菌感染原液中，在钵中研磨1分钟以上制得感染源菌液。

3、用无菌2～4毫升注射器，吸取所得感染源菌液，将针头从蝙蝠蛾幼虫排泄口插入后，压入幼虫肠道感染源菌液0.3～0.5毫升，再将该幼虫于无光，17～21℃，相对湿度78～85%的条件下培养，培养时间大于15天。

本发明的有益效果：感染率高达90%以上，周期短，成本低，在规模化培养虫菌复合体冬虫夏草的过程中，具有很好的应用前景。

具体实施方式

按照本发明方法给出的以下步骤，在所给条件范围内变化，从而分别进行具体试验，结果表明均能实现发明目的：

1、制作无菌感染原液，将以下重量比的成分混合：

家蚕蛹28～34%，

马铃薯5～7%，

硫酸镁0.008~0.01%，

磷酸二氢钾0.035~0.05%，

余量为水，

经煮沸，过滤，灭菌制成无菌感染原液。

2、制作感染源菌液，采用中国被毛孢为感染菌源，用接种针挑离其纯菌丝体放于无菌感染原液中，放入量为每5毫升无菌感染原液中放入10～15针所挑离的中国被毛孢，研磨后制成感染源菌液。

3、用无菌2～4毫升注射器，吸取所得感染源菌液，将针头从蝙蝠蛾幼虫排泄口插入后，压入幼虫肠道感染源菌液0.3～0.5毫升，再将该幼虫于无光，17～21℃，相对湿度78～85%的条件下培养，培养时间大于15天。