[发明专利]菲律宾刺参硫酸软骨素多糖及其提取方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种大分子化合物--菲律宾刺参硫酸软骨素多糖及其提取方法和用途，属于天然高分子领域。

背景技术

研究发现存在于海参体壁的多糖主要分两类：一类为岩藻糖基化的海参硫酸软骨素(sea cucumber fucolysated chondroitin sulfate)(38，39)，是由D-N-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-岩藻糖组成的分支杂多糖，相对分子质量为4万-5万；另一类为海参岩藻多糖(Holothurian fucan)(40，41)，是由L-岩藻糖所构成的直链多糖，相对分子质量为8万-10万。两者的组成糖基虽不同，但糖链上都有部分羟基发生硫酸酯化，并且硫酸酯基类多糖含量均在32％左右，两种海参多糖的特殊结构，均为海参所特有。

海参硫酸软骨素是海参两种主要多糖之一，其结构复杂，且因海参种类和生长环境的不同而有差别。近年来，国内外对海参硫酸软骨及其异构物的药理作用进行了研究，证明其具有抗肿瘤，提高机体免疫力，抗血栓，抗凝血，降低血粘度，保护神经组织及抑菌等多种生理活性，对人体的生理功能调控、维系生命最佳状态具有极其重要的意义。

目前，文献研究报道的海参硫酸软骨素主要有以下两种：

其一为Paulo A.S.等从L.grisea海参中提取出一种海参多糖，类似硫酸软骨素的结构，糖组成分析表明其含有Fuc∶GalNAc∶GlcA∶SO4约为1∶1∶1∶2.7，采用稀酸酸水解并结合NMR技术观察水解过程中核磁共振¹H NMR谱图变化表明，岩藻糖支链主要连接在葡萄糖醛酸的3位上。采用硫酸软骨素ABC酶并对产物进行二糖组成分析，表明主链含有硫酸软骨素，硫酸软骨素4-S和的硫酸软骨素4，6-S。而核磁分析表明其支链岩藻糖以4-O-SO₄取代为主，并含有3，4和2，4-O-SO₄取代。

其二为Kariya等从日本刺参(S.japonicus)体壁中分离纯化出海参糖胺聚糖，经酸解后测定其单糖和硫酸基组成，发现其为硫酸软骨素E型结构，硫酸基(SO₄^2-)、氨基半乳糖(GalN)、葡萄糖醛酸(GlcUA)和岩藻糖(Fuc)的摩尔比为3∶2∶2∶1。进一步的结构分析表明这种硫酸软骨素的岩藻糖支链以2，4-O-SO₄为主，并且含有3，4和4-O-SO₄取代。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种菲律宾刺参硫酸软骨素多糖及其提取方法和用途；该菲律宾刺参硫酸软骨素多糖具有抗凝血、抗血栓活性等活性。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种菲律宾刺参硫酸软骨素多糖，其结构式如下：

作为本发明的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的改进：主链为硫酸软骨素E结构，同时带有硫酸岩藻糖构成的支链，该支链通过糖苷键连接在主链的β-D-葡萄糖醛酸上，且硫酸基的取代方式为75％3，4-O-SO₄，20％2，4-O-SO₄以及5％4-O-SO₄。

与目前以发现的海参硫酸软骨素相比，本发明的菲律宾刺参硫酸软骨素多糖其主要特征为支链含有75％3，4-O-SO₄取代。

本发明同时提供了上述菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的提取方法，包括以下步骤：

1)、将固体海参(为含水量小于10％的菲律宾刺参，上述％为质量％)粉碎或切成小块，加入木瓜蛋白酶于50～70℃酶解12～48小时；木瓜蛋白酶与固体海参的质量比为1∶8～12；

2)、将步骤1)所得的酶解后产物离心，取上清；向上清中加入质量浓度为8％～12％的氯化十六烷基吡啶(CPC)溶液放置20～28小时后，离心，弃去上清液；得沉淀；

氯化十六烷基吡啶溶液与步骤1)中的固体海参的液料比为：1.4～1.8ml氯化十六烷基吡啶溶液/1g固体海参；

3)、将步骤2)所得的沉淀溶解于NaCl的乙醇水溶液中，再加入体积浓度≥95％的乙醇，3～5℃放置22～26小时，离心，沉淀用体积浓度≥80％的乙醇洗涤后干燥；将干燥后沉淀先用蒸馏水溶解，然后用截流分子量为6000Da的中空纤维膜超滤并脱盐，浓缩，冻干，得菲律宾刺参硫酸软骨素多糖的粗产物(即海参粗多糖)；