[发明专利]从犬粪便中检测细粒棘球绦虫病原的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒及这种试剂盒的用途，确切讲本发明涉及一种 用于检测犬粪是否存在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)病原的检测试 剂盒和该试剂盒的用途。

背景技术

细粒棘球绦虫的幼虫——细粒棘球蚴可感染多种动物(包括人)，可引起危害 人类健康并阻碍畜牧业发展的人畜共患寄生虫病，即细粒棘球蚴病，又称囊型 棘球蚴病或囊型包虫病。目前细粒棘球绦虫存在10个基因型，即G1～G10。在 我国主要存在G1和G6两型，其中G1型分布最广，危害最为严重。

犬科动物是细粒棘球绦虫的终末宿主，成虫寄生于其小肠内，虫卵随粪便 排出，污染食物、饮水和周围环境，构成主要传染源。所以及时、准确地检测 流行区终末宿主棘球绦虫的感染情况和对感染动物进行强制驱虫，对控制棘球 蚴病的流行、综合防控措施实施和防治效果的评价等都具有十分重要的意义。 在我国西北部地区，流浪犬或未实施定期驱虫等措施的犬感染最为严重，是最 主要的传染源。

目前，对细粒棘球绦虫感染犬的检测方法有常规检测法(槟榔碱导泻法和 剖检法)、粪DNA-PCR检测法和粪抗原-ELISA检测法(Boufana BS，et al. Evaluation of Three PCR assays for the identification of the sheep strain(Genotypel) of Echinococcus granulosus in canid feces and parasite tissues[J].Am J Trop Med  Hyg，2008，78(5)：777-783；Pierangeli NB，et al.Usefulness and validation of a  coproantigen test for dog echinococcosis screening in the consolidation phase of  hydatid control in Neuquén，Argentina[J].Parasitol Iht，2010，59(3)：394-399.)。但这 些方法都存在一定的缺点，敏感性和特异性都较低，其中常规检测法还具有感 染人和周围环境的危险。

发明内容

本发明提供一种可克服现有技术不足，从犬粪便中检测细粒棘球绦虫病原 的试剂盒，以及用这种试剂盒配制相应试剂的方法和检测方法。

本发明的从犬粪便中检测细粒棘球绦虫病原的试剂盒中包括有四个特异引 物，这四个特异引物分别是上游外部引物F3：5′- TGGTTTTAGGTATTTGATTAGGT-3′(SEQ №1)；下游外部引物B3：5′- ACCACTACATACCAACACC-3(SEQ №2)；上游内部引物FIP：5′- TAACCCAAACGTTACCACATCAAAAGAATTCTAGATTTTTGTCTACTATGGG TTGT-3′(SEQ №3)；下游内部引物BIP：5′- ATACTGGTCATTATTTCGGCGGGAATTCCAAACAAAACAATCAACTTCAAC- 3′(SEQ №4)。

为方便使用，本发明的试剂盒中还有LAMP反应液、引物混合物、Bst DNA 聚合酶、标准阳性模板以及显色剂。

利用本发明的检测试剂盒可以配制检测犬粪便中细粒棘球绦虫病原的试 剂。

本发明是一种环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isotheral amplification  method，LAMP)，这是一种类似于PCR的核酸分子检测技术，但比PCR更特异、 敏感、快速、简单，且受粪DNA中PCR抑制因子影响较小，简单的仪器如恒 温水浴锅即可完成反应。然而到目前为止，尚无应用此方法在犬粪便中检测细 粒棘球绦虫病原的报道。本发明为一种快速检测犬粪便中细粒棘球绦虫病原体 的方法，敏感性高于PCR方法，同时不需要复杂的操作系统，在普通的实验室 就可进行；具有操作简单、敏感性高、特异性强、快速等特点，因此存在潜在 的实验研究和极具潜力的临床应用价值。

附图说明

图1A为采用本发明的LAMP扩增及显色结果，其中：1为呈浅绿色的阳性 粪DNA；2为呈浅明黄色的阴性对照。