[发明专利]杂色鲍钙调蛋白cDNA序列

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学及功能基因应用相关领域，尤其是涉及杂色鲍钙调蛋白cDNA序列。

背景技术

钙调蛋白（Calmodulin）是一种存在于几乎所有的真核细胞中的钙结合蛋白。它与Ca²⁺结合后可以进一步结合多种目标蛋白，从而调节包括炎症反应、代谢、细胞凋亡、肌肉收缩、胞内运动、短期和长期记忆、神经生长及免疫反应等多种生理过程。因此，钙调蛋白属于细胞信号通路中的上游关键基因，其表达量的上调或下降会引起下游信号途径中一系列多种多样的反应和变化。目前，尚未在鲍鱼物种中鉴定到钙调蛋白相关基因及产物。

发明内容

本发明的目的是提供一种杂色鲍钙调蛋白cDNA序列。

本发明以杂色鲍为材料，提取全组织（肌肉和内脏团）的总RNA，进行反转录后cDNA。然后对所得的cDNA进行sfiI酶切，分别割胶回收0.5~1和1~3kb之间的片段，并与pDNR-LIB载体连接转化大肠杆菌DH10B感受态，建立cDNA文库。通过生物信息学的方法从众多序列中鉴定到一个与已知钙调蛋白基因序列相似的序列。根据鉴定得到的基因序列设计特异引物，上游引物：5’-CGAAACATTTCTGTGAAT-3’；下游引物：5’-TGAGGTCATTACATGGAG-3’。以文库中钙调蛋白cDNA序列为模板，采用上述特异引物进行PCR扩增得到杂色鲍钙调蛋白基因序列，其具有钙调蛋白的保守结构域及活性中心，其四个保守结构域分别位于蛋白序列的16—36、45—72和84—109和118—145区间；第一个保守结构域的活性中心包括：Asp-20、Asp-22、Asn-24和Glu-31；第二个保守结构域的活性中心包括：Asp-56、Asn-58、Asn-60和Glu-67；第三个保守结构域的活性中心包括：Asp-93、Asp-95、Ser-97和Glu-104；第四个保守结构域的活性中心包括：Asp-129、Asn-131、Asp-133和Glu-140。

本发明所得的杂色鲍钙调蛋白基因序列，其具体DNA核苷酸如下：

cattagattg ccgtcttgta taacaaaggc gaaacatttc tgtgaatccg agtccgagcg    60

atgtccaatc tgtcgcagag ggagaaacag ctgtacacca ggttcttcca ccaggtggac  120

attgatggaa acgggtacat caccctggat gaactagcaa ccttgtgcaa aaaactcaag  180

ctcggcttga cgcgacaaca gattgtggac gtgtttatga acatggacac cgacaacaac  240

ttgaccatta ccttaaacga attcttgtcg gcaatgccaa agattgaacg tgaacaactc    300

tcgtatggtg agatgaggtg ggcatttgac cagatagaca cagatggcag cggcctgctt  360

gacgctgatg agctgaagga agtgctgctc aaatgtggac gttcattgac gttgtcacaa   420

gtgaagacta tgattgccaa agtcgacatc aacggtgacg gcaaattgaa ctttgatgaa  480

tttattactc tttttggcta agactacgta ctccatgtaa tgacctcagt tcgacgaacg     540

tcaaagttga gtgatggttg ttcctaacgt cgtg                          574

其相应的氨基酸序列如下：

Met Ser Asn Leu Ser Gln Arg Glu Lys Gln Leu Try Thr Arg Phe 

1                          5                            10                           15

Phe His Gln Val Asp Ile Asp Gly Asn Gln Tyr Ile Thr Leu Asp