[发明专利]中华按蚊抗药性TaqMan PCR检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测中华按蚊中kdr基因突变位点的专用引物，由引物1和引物2组成，所述引物1和引物2的核苷酸序列分别为序列表中序列1和序列表中序列2。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：

所述突变位点为L1014F或L1014C。

3.一种检测中华按蚊中kdr基因突变位点的试剂，由试剂1和试剂2组成，

所述试剂1由权利要求1所述专用引物、探针2和探针3组成；

所述试剂1由权利要求1所述专用引物、探针1和探针3组成；

所述探针1的核苷酸序列为序列表中的序列3；

所述探针2的核苷酸序列为序列表中的序列4；

所述探针3的核苷酸序列为序列表中的序列5；

所述探针1、探针2和探针3的3’末端均标记MGB基团；

所述探针1和探针2的5’末端均标记FAM基团；

所述探针3的5’末端标记VIC基团。

4.一种检测中华按蚊中kdr基因突变位点的反应试剂，由试剂A和试剂B组成，所述试剂A包括权利要求3所述试剂中的所述试剂1；所述试剂B包括权利要求3所述试剂中的所述试剂2。

5.根据权利要求4所述的反应试剂，其特征在于：

所述试剂A由权利要求3所述试剂中的所述试剂1和TaqMan反应缓冲液组成；所述试剂B由权利要求3所述试剂中的所述试剂2和TaqMan反应缓冲液组成；

所述试剂中的各引物在对应的所述试剂中的浓度均为9μM；

所述试剂中的各条探针在所述对应的试剂中的浓度均为5μM；

所述试剂A和所述试剂B均为独立包装。

6.一种制备检测中华按蚊中kdr基因突变位点的试剂盒，为包括权利要求4或5所述的反应试剂的试剂盒；

所述突变位点为L1014F或L1014C。

7.权利要求1或2所述专用引物或权利要求3所述的试剂或权利要求4或5所述反应试剂或权利要求6所述试剂盒在检测中华按蚊中kdr基因突变位点、检测中华按蚊抗药性或制备检测中华按蚊抗药性产品中的应用；所述突变位点具体为L1014F或L1014C，所述抗药性为抗菊酯类药物；所述菊酯类药物具体为溴氰菊酯、氯菊酯或高效氯氰菊酯。

8.一种检测或辅助检测中华按蚊中kdr基因的突变位点的方法，包括如下步骤：

用权利要求4或5所述的反应试剂中的所述试剂A和所述试剂B分别对待测中华按蚊进行TaqMan PCR扩增，得到A反应产物和B反应产物；

检测反应产物，若A反应产物在FAM和VIC通道均无信号，且B反应产物仅在FAM通道有信号，则所述kdr基因不含或候选不含有所述突变位点；

若A反应产物在FAM通道有信号且在VIC通道无信号，且B反应产物在FAM和VIC通道均无信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014C；

若A反应产物在FAM通道无信号且在VIC通道有信号，且B反应产物仅在VIC通道有信号，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014F；

若A反应产物在FAM通道有信号且在VIC通道无信号，且B反应产物仅在FAM通道有信号，则所述kdr基因的突变位点为或候选为L1014C；

若A反应产物在FAM通道无信号且在VIC通道有信号，且B反应产物在FAM通道和VIC通道均有信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F；

若A反应产物在FAM通道和VIC通道均有信号，且B反应产物仅在VIC通道有信号，则所述kdr基因突变位点为或候选为L1014F和L1014C。