[发明专利]一种柯萨奇病毒A16型病毒株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及病毒学、分子生物技术领域，具体地说，涉及一种新的柯萨奇病毒A16型病毒株及其应用。

背景技术

手足口病(Hand foot mouth disease，HFMD)是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道，常见于婴幼儿，由肠道病毒引起。临床上以发热和手、足、口腔等部位出现皮疹、溃疡等表现为主，与心肌炎、心包炎、难治性休克等综合性疾病相关。

柯萨奇病毒(Coxasckievirus)A16型(Cox A16，CA16)是手足口病主要病原体之一，是小RNA病毒科的单股正链RNA病毒，呈20面立体对称球形，直径约23-30nm。主要经粪-口、呼吸道和密切接触传播，可通过胎盘传给胎儿引起宫内感染。早期发现的手足口病的病原体主要为Cox A16型，20世纪70年代后，与EV71感染交替出现，成为手足口病的主要病原体。我国北京、福建、天津、吉林、山东、广东、深圳、浙江、四川、安徽等多个省份均有报道。手足口病的爆发和流行严重影响了人们的日常生活，造成巨大的经济损失和社会负担，利用病毒疫苗从根本上切断病毒的传播是目前较为有效的预防途径之一，目前尚无CA16病毒疫苗的报道，因此分离出适于疫苗生产的CA16病毒株具有巨大的经济和社会效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的柯萨奇病毒A16型病毒株及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种柯萨奇病毒A16型病毒株，其保藏号为CGMCC No.5371，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2011年10月17日。在电镜下观察该毒株，病毒颗粒呈20面立体对称球形，直径约30nm。

本发明还提供上述病毒株产生的多聚酶、壳蛋白、糖蛋白、核蛋白或非结构蛋白。

本发明还提供编码上述多聚酶、壳蛋白、糖蛋白、核蛋白或非结构蛋白的基因。

本发明还提供含有上述基因的载体以及含有该载体的宿主细胞。

本发明还提供所述病毒株，所述多聚酶、壳蛋白、糖蛋白、核蛋白或非结构蛋白，编码所述多聚酶、壳蛋白、糖蛋白、核蛋白或非结构蛋白的基因，含有所述基因的载体或含有所述载体的宿主细胞在制备预防或治疗由柯萨奇病毒所致传染病的药物或疫苗及诊断试剂中的应用。

前述的应用，其是将所述柯萨奇病毒A16型病毒株经过感染细胞(如vero细胞、人二倍体细胞或其它敏感细胞)、培养、收获病毒液、灭活和纯化后，得到疫苗原液，用于进一步制备CA16疫苗。

本发明还提供以柯萨奇病毒A16型病毒株，保藏号CGMCCNo.5371为免疫原制得的抗体或杂交瘤细胞或抗血清。

本发明还提供用于检测所述柯萨奇病毒A16型病毒株的引物，包括CA16上游引物：5’-TTGCAGACATGATTGACCAG-3’和CA16下游引物：5’-GAGTGATGGTTCAACACACA-3’。

本发明还提供含有上述引物的用于检测柯萨奇病毒A16型的试剂盒。

本发明进一步提供所述柯萨奇病毒A16型病毒株产生的VP1蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码该VP1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。对VP1全长序列分析和质谱分析结果表明该毒株为CA16病毒，且无外源物污染，有较好的免疫原性，是一株效果良好的病毒株。

本发明还提供一种制备抗体或杂交瘤细胞或抗血清的方法，其是以本发明的柯萨奇病毒A16型病毒株(CGMCC No.5371)为免疫原。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

(一)通过蚀斑法分离得到的本发明的单克隆CA16病毒株，其子代病毒表现为遗传稳定，可用于人用CA16疫苗生产。

(二)利用本发明的CA16病毒株或由其生产的疫苗可用于预防由CA16病毒引起的疾病(例如手足口病，尤其是儿童的手足口病)，且具有滴度稳定、免疫原性较好、免疫剂量小的特点。

(三)本发明的CA16病毒株可在Vero细胞中高效增殖，病毒滴度可达7.41g CCID50/ml。

附图说明

图1为本发明CA16病毒株电镜观察结果(放大比例：100,000倍)。

图2为本发明CA16病毒株蛋白质谱分析结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。