[发明专利]一种水中微囊藻毒素的检测方法

权利要求书

1.一种水中微囊藻毒素的检测方法，包括如下步骤：

(1)将微囊藻毒素的单克隆抗体连接到磁性纳米颗粒上并分散于水或磷酸盐缓冲溶液中，得到连接有所述微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液；

(2)将拉曼探针分子吸附于银纳米颗粒上并用二氧化硅进行包覆得到包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒，然后将所述微囊藻毒素连接到所述包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒上并分散于水或所述磷酸盐缓冲溶液中得到连接有所述微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液；

(3)将至少3种不同浓度的所述微囊藻毒素的标准水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液A；将所述孵育液A与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物A；测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱，得到拉曼光谱的峰强与所述藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线；

(4)将含有微囊藻毒素的待测水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液B，所述待测水溶液与步骤(3)中所述标准水溶液的体积相同；将所述孵育液B与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物B，所述反应时间与步骤(3)中所述反应时间相同；测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱，然后根据所述拉曼光谱的峰强与所述微囊藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线即得待测水溶液中微囊藻毒素的浓度。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述拉曼探针分子的结构式如式(a)所示，其中，R选自H、NH₂、烷基、烷氧基、COOH或OH，

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于：所述磁性纳米颗粒为氧化铁、金属合金、铁氧体、氧化铬或氮化铁；所述磁性纳米颗粒度的粒径为100nm～10μum。

4.根据权利要求1-3中任一所述的检测方法，其特征在于：所述银纳米颗粒的粒径为1nm～200nm；所述二氧化硅层的厚度为1nm～30nm。

5.根据权利要求1-4中任一所述的检测方法，其特征在于：所述微囊藻毒素的标准水溶液的质量体积浓度为0～50μg/L。

6.根据权利要求1-5中任一所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中在测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱之前，还包括用所述磷酸盐缓冲溶液洗涤所述磁性免疫复合物A的步骤。

7.根据权利要求1-6中任一所述的检测方法，其特征在于：步骤(4)中在测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱之前，还包括用所述磷酸盐缓冲溶液洗涤所述磁性免疫复合物B的步骤。

8.根据权利要求1-7中任一所述的检测方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲溶液的组成如下：NaCl 8.00g，KCl 0.20g，KH₂PO₄ 0.20g，Na₂HPO₄·H₂O 1.56g和蒸馏水1000ml。