[发明专利]一种刺槐的繁殖方法

权利要求书

1.一种刺槐繁殖方法，包括如下顺序进行的步骤：

1)采集刺槐荚果；

2)将刺槐荚果进行表面灭菌后取出其合子胚，获得无菌合子胚；

3)将无菌合子胚接种到愈伤组织诱导培养基上，进行愈伤组织诱导培养，获得愈伤组织；

4)将愈伤组织接种于体细胞胚诱导培养基上，进行体细胞胚诱导培养，获得原胚培养物；

5)将原胚培养物接种于体细胞胚成熟培养基中进行体细胞胚的成熟培养，获得体细胞胚；

6)将成熟的体细胞胚接种于萌发培养基上进行萌发培养，获得体胚苗；

7)将体胚苗接种于壮苗培养基上进行壮苗培养，促进体胚苗的生长，获得试管壮苗；

8)将试管壮苗进行炼苗、移栽，即得。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述的刺槐荚果是处于刺槐开花后第25天至第75天这一时间段内的刺槐荚果，优选为处于刺槐开花后第45天至第65天这一时间段内的刺槐荚果，更优选为处于刺槐开花后第55天至第65天这一时间段内的刺槐荚果，最优选为刺槐开花后第55天的刺槐荚果。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤3)中所述愈伤组织诱导培养基是MS基本培养基+2-(N-吗啡啉)乙磺酸500mg/L+2，4-二氯苯氧基乙酸0.3-6.0mg/L+6-苄氨基腺嘌呤0-3.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH值为5.8。

4.如权利要求1或3所述的方法，其特征是步骤3)中所述愈伤组织诱导培养在以下条件下进行：黑暗条件下，培养温度为26±2℃。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤4)中所述体细胞胚诱导培养基是MS基本培养基+2-(N-吗啡啉)乙磺酸500mg/L+谷氨酰胺250mg/L+水解酪蛋白500mg/L+萘乙酸0.1-2.0mg/L+6-苄氨基腺嘌呤0-1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH值为5.8。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤4)中所述体细胞胚诱导培养在以下条件下进行：黑暗条件下，培养温度为26±2℃。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤5)中所述的体细胞胚成熟培养基为MS基本培养基+水解酪蛋白500mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。

8.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤6)中所述的萌发培养基为MS基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。

9.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤7)中所述壮苗培养基为+吲哚丁酸0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。

10.如权利要求1所述的方法，其特征是步骤5)中所述体细胞胚成熟培养、步骤6)中所述萌发培养或步骤7)中所壮苗培养在以下条件下进行：培养温度为26±2℃，光照强度为1500-2000lux，光照周期为14-16小时光照/8-10小时黑暗；步骤8)中所述的炼苗移栽包括如下顺序进行的步骤：打开培养瓶的瓶盖，在移栽室中炼苗1天；然后将试管苗取出，用自来水洗净根部残留的琼脂培养基，移栽到刺槐无土栽培基质中进行移栽培养5-6周后再定植于大田。