[发明专利]一种快速高效提取饮用水中总DNA的方法

权利要求书

1.一种快速高效提取饮用水中总DNA的方法，其步骤为

第一步：采样及样品前处理

在灭菌的水龙头上安装净水器，打开水龙头，让水质达标的饮用水从净水器的滤芯出水口出水，开始计时滤水，直至该滤芯被彻底堵住后方取下；

过滤完成后及时将净水器关闭取下，卸下滤芯，取出里面多层的中空丝膜，放置到灭菌的烧杯中，加入超纯水，轻轻震荡让中空丝膜均匀散落在烧瓶中；

然后将烧杯放置于超声波清洗机中超声振荡，超声后将水在0.98兆帕大气压下过0.45微米醋酸纤维酯滤膜；

第二步：饮用水中总DNA提取

将滤膜尽量剪碎，将碎片装入到样品裂解管，进行如下处理：

（1）在样品裂解管中加入978微升磷酸盐缓冲液和122微升MT缓冲液；

（2）用研磨珠均质器在4800转/分钟条件下裂解90秒，彻底破碎微生物细胞；

（3）将样品裂解管在14000 g转速下离心15分钟；

（4）将离心后管内的上清液转移到新的2.0毫升离心管中，加入250微升蛋白沉淀溶液，充分振荡2分钟；

（5）14000g下再次离心5分钟去除沉淀，将上清液全部转移到干净的15毫升离心管中；

（6）将一种能结合DNA溶液振荡摇匀后，加1毫升该溶液到15毫升离心管中；

（7）用涡旋振荡器振荡离心管2分钟后将离心管放在支架上静止3分钟，让溶液中的二氧化硅颗粒沉淀；

（8）去除500微升上清液；

（9）将离心管中剩下的混合物重新混匀，取600微升溶液到离心过滤柱上，14000g离心1分钟后，去除收集管中的液体；重复上述过程，继续将剩下的混合物加入到过滤柱上离心；

（10）加500微升的SEWS-M溶液到离心柱中，用移液枪轻轻吹打溶液，将里面混合物彻底混匀；

（11）14000g离心1分钟，丢弃收集管中液体；

（12）不加入任何试剂，14000g离心2分钟，去除离心柱中残留的乙醇，丢弃原收集管，换上一个新的干净的1.5毫升离心管；

（13）将离心柱在室温下空气干燥5分钟；

（14）先加入50微升55度预热的无菌水到离心柱中，用移液枪轻轻搅动，若溶解不完全，则在加入10微升无菌水搅动，直至离心柱中二氧化硅全部成熔融状态；

（15）将离心柱放置55度烘箱中加热5分钟；

（16）14000g离心1分钟后，离心管中收集到得液体即提取所得饮用水中总DNA，零下20度保存。

2.根据权利要求1所述的快速高效提取饮用水中总DNA的方法，其特征在于第一步采样及样品前处理中首先选取合适的采样点，要求出水水质达标，水中无明显颗粒状杂质，水压正常；打开取样口水龙头，常速空放5分钟，去除水管中滞留的死水，然后用酒精灯灼烧水龙头，杀灭水龙头附近的细菌。

3.根据权利要求1所述的快速高效提取饮用水中总DNA的方法，其特征在于第一步采样及样品前处理中在灭菌的水龙头上安装一种家庭型净水器Torayvino MK2-EG，安装完成后，打开水龙头，让水从该净水器的滤芯出水口出水，开始计时滤水，直至该滤芯被彻底堵住后方取下，根据水压不同滤水时间一般为24-36小时，过滤水总量在1500-2000升。