[发明专利]一种低蛋白米的制备方法

权利要求书

1.一种低蛋白米的制备方法，其特征是，包括步骤如下：

（1）首先收集栽培稻品种和野生稻材料，并分别测定籽粒蛋白质含量；

（2）选择低蛋白含量的品种和低蛋白含量的野生稻杂交获得杂交一代即F1的种子；

（3）种植F1，利用分子标记技术剔除假杂种，令其自交获得F2的种子；

（4）剥取F2种子的胚消毒后培养在固体培养基上，获得幼苗后并令其结种子，取叶片用常规法提取叶片DNA，并用在野生稻和栽培稻间这两个亲本间扩增出的DNA条带有差异的SSR引物，利用PCR仪扩增F2的DNA，确定每对引物在各个幼苗中的带型，即属于野生稻的带型、属于栽培稻的带型和属于野生稻与栽培稻的混合带型，以此构建分子标记遗传图谱，作为QTL定位的基因型数据；同时测定F2胚乳部分的蛋白质含量，作为QTL定位的表现型数据；

（5）利用QTL分析软件对基因型和表现型数据进行分析，获得控制蛋白质含量的QTL情报信息；

（6）依据分子标记遗传图谱选同时具有所有来源于野生稻的，控制低蛋白的，并且是纯合QTL的F2植株与栽培稻亲本回交，获得BC1F1的种子；

（7）种植BC1F1，经分子标记技术辅助选择剔除假杂种，获得BC1F2的大量种子；

（8）种植BC1F2，利用分子标记辅助选择技术确定同时具有来源于野生稻的控制低蛋白的纯合QTL的单株与栽培稻亲本再次回交，获得BC2F1的种子；

（9）种植BC2F1，经分子标记技术辅助选择剔除假杂种，获得BC2F2的大量种子；

（10）按照（8）的方法选择农艺性状好，同时具有野生稻的低蛋白的纯合QTL，以及含有1个以上源于栽培稻的控制低蛋白的QTL的BC2F2单株与栽培稻亲本再回交一次，获得BC3F1的种子；

（11）将得到的BC3F1的种子繁殖，经分子标记技术辅助选择剔除假杂种，获得大量的BC3F2的种子；

（12）种植BC3F2，选取农艺性状好的单株，通过分子标记辅助选择技术确定同时含有来源于野生稻的控制低蛋白的QTL的，同时含有2个以上源于栽培稻的控制低蛋白的QTL的单株，在孕穗期采取尚未吐穗的穗子，在无菌条件下剥取其花药抖落到诱导培养基上，在暗光下培养诱导形成愈伤组织，然后转移到分化培养基上分别诱导生根及出芽，最后形成实生苗，经自然加倍后获得染色体纯合的个体，成熟后单株收获种子，次年种植这些种子成株行，成熟后按照株行收获，并采用凯氏定氮法测定其籽粒蛋白质含量，从中发现农艺性状与越光相似而蛋白质含量低于5.0%的单株，经连续2年种植，表明该单株低蛋白质含量特性能够稳定遗传。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤（2）所述野生稻为云南元江普通野生稻。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述云南元江普通野生稻的蛋白质含量≤6.5%。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述栽培稻品种为越光。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述栽培稻品种的蛋白质含量≤8.7%。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，步骤（5）所述QTL分析软件为Map Manager QTXb17分析软件。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是，所述分子标记技术为利用SSR引物或Indel引物对叶片DNA进行PCR扩增，并通过聚丙烯凝胶电泳检测所扩增的DNA条带是属于哪个亲本的技术。