[发明专利]日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因及其DNA疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因(简称SjTGR基因)及其DNA疫苗。

背景技术

血吸虫病是一种人和动物都会受传染的寄生虫病，血吸虫发育的不同阶段，尾蚴、童虫、成虫和虫卵均可对宿主引起不同的损害和复杂的免疫病理反应，流行范围广，对人和家畜均产生严重危害。目前，主要采用药物，例如吡喹酮，对已经感染血吸虫病的人或动物进行治疗，但是这不能解决再次感染的问题。要想更有效的防治血吸虫病，比较可行的措施是采用疫苗与药物治疗相结合的方式。因此，研制新的抗血吸虫病疫苗仍是当今血吸虫病防治研究的重点之一。

硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶是血吸虫体内一种特殊的氧化还原酶类，对保护血吸虫不受宿主免疫系统和自身新陈代谢而产生的游离氧的损害具有重要作用。目前尚没有关于日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因及其DNA疫苗的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因(SjTGR基因)，该SjTGR基因可用于制备抗血吸虫的DNA疫苗，免疫保护效果显著。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种日本血吸虫基因，所述基因为编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因。

优选的，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示的DNA序列。

在本发明的另一方面，提供了一种日本血吸虫蛋白质，所述蛋白质具有硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶活性，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述日本血吸虫基因的重组载体。

优选的，所述重组载体的空载体为pVAX1质粒。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述重组载体的抗血吸虫疫苗。

优选的，该抗血吸虫疫苗为包被有金颗粒的SjTGR-pVAX1 DNA疫苗。

在本发明的另一方面，还提供了一种包含上述重组载体宿主细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述日本血吸虫基因在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗中的应用。

利用本发明日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR基因制备的DNA疫苗，在小鼠免疫保护性实验中，使免疫组小鼠的减虫率与肝脏减卵率分别达到38.82％和44.51％(与pVAX1空载体对照组相比)，表明本发明SjTGR基因的DNA疫苗对血吸虫病有很好的免疫预防效果，能有效降低宿主体内虫体数目，更重要的是肝脏内虫卵数目的减少可以大大降低宿主肝脏的病理反应。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明实施例1日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR-pVAX1重组质粒双酶切鉴定图；

图2是本发明实施例1日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR-pVAX1重组质粒PCR鉴定图。

具体实施方式

下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京：科学出版社，2002)中所述的方法进行。

本发明利用PCR从日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA中扩增到获得的日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR的基因序列。进一步利用BamHI和XhoI将SjTGR基因克隆至真核表达质粒pVAX1中，构建了SjTGR-pVAX1 DNA疫苗，在大肠杆菌中大量扩增后，用试剂盒提取纯化得到免疫用的重组SjTGR-pVAX1质粒，并用金颗粒包被该重组DNA质粒制备免疫用子弹。在小鼠腹部剃毛后用基因枪轰击制备的子弹以免疫小鼠，3周后加强免疫一次，2周后攻击日本血吸虫尾蚴，攻击后6周剖杀小鼠，门静脉灌洗收集成虫，肝脏用KOH消化后计算每克肝组织所荷虫卵数。结果表明本发明SjTGR基因的DNA疫苗对血吸虫病有很好的免疫预防效果。

实施例1日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶SjTGR基因的克隆和SjTGR-pVAX1重组质粒的构建

1.1实验动物雄性新西兰白兔，2.5kg～3kg，购自上海罗泾飞达实验动物养殖场。