[发明专利]一种将Tullgren法获得的粗品中土壤动物与土高效分离的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离的方法。

背景技术

土壤动物是指生活在土壤或地表凋落物层中的动物。土壤动物在分解生物残体、改变土壤理化性质、促进土壤物质循环和能量转化过程中起着重要作用。研究土壤动物需将其从野外土壤中先分离出来。Tullgren法是一种分离收集土壤动物的常用的方法，它是将采集到的土壤放在2mm孔径的筛子上，筛子上方用装有25-40W白炽灯的筒罩罩着烘烤，筛子下方放一漏斗，漏斗出口下放一个装有10-20mL酒精的50mL烧杯。开灯后分离器内土样温度升高，水分减少，土壤动物受热向下移动，直到离开土，顺着漏斗掉进酒精里，以此收集土壤动物。由于直径小于2mm的土很容易通过筛子掉进烧杯中，土与土壤动物混合，使得提取土壤动物效率低，个体较小和与土颜色相近的土壤动物不易被发现，分离工作繁重，样品易损失，统计误差增大。

发明内容

本发明的目的是解决Tullgren法获得的粗品中土壤动物提取效率低、个体较小和与土颜色相近的土壤动物不易被发现的问题，而提供一种将Tullgren法获得的粗品中土壤动物与土高效分离的方法。

将Tullgren法获得的粗品中土壤动物与土高效分离的方法按以下步骤实现：

一、称取500g蔗糖溶于500mL蒸馏水中，获得蔗糖溶液；

二、采用Tullgren法分离土壤动物，然后将收集土壤动物的烧杯静置1-2h，然后倒出上清液并收集土壤动物，再向烧杯内的沉淀粗品中加入8～10ml的蔗糖溶液，振荡后有土壤动物浮到蔗糖溶液中，静置20～30s，倒出液体于培养皿中，重复用蔗糖溶液分离1～3次；

三、用镊子夹取大型土壤动物并用体积浓度为95％的酒精进行清洗，收集保存，然后用吸管吸出中小型土壤动物于另一培养皿中，加入20～25mL体积浓度为95％的酒精进行清洗，重复清洗1～3次后收集保存，即完成将Tullgren法获得的粗品中土壤动物与土高效分离的方法。

本发明中使用质量比浓度为50％的蔗糖溶液可以使土壤中的大部甚至全部土壤动物与土分离，避免了洗涤样品过程中混入土，解决了动物个体较小和与土颜色相近的土壤动物不易被发现的问题，提高了提取效率和统计精度；用体积浓度为95％的酒精反复清洗以降低蔗糖含量并提高酒精浓度。本发明与现有分离方法相比，分离效率提高了1～10倍，土壤动物损失率接近零，统计精度提高了5％～10％。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式将Tullgren法获得的粗品中土壤动物与土高效分离的方法按以下步骤实现：

一、称取500g蔗糖溶于500mL蒸馏水中，获得蔗糖溶液；

二、采用Tullgren法分离土壤动物，然后将收集土壤动物的烧杯静置1-2h，然后倒出上清液并收集土壤动物，再向烧杯内的沉淀粗品中加入8～10ml的蔗糖溶液，振荡后有土壤动物浮到蔗糖溶液中，静置20～30s，倒出液体于培养皿中，重复用蔗糖溶液分离1～3次；

三、用镊子夹取大型土壤动物并用体积浓度为95％的酒精进行清洗，收集保存，然后用吸管吸出中小型土壤动物于另一培养皿中，加入20～25mL体积浓度为95％的酒精进行清洗，重复清洗1～3次后收集保存，即完成将Tullgren法获得的粗品中土壤动物与土高效分离的方法。

本实施方式与现有分离方法相比，分离效率提高了1～10倍，土壤动物损失率接近零，统计精度提高了5％～10％。

本实施方式步骤一中蔗糖溶液的质量比浓度为50％。

本实施方式步骤二中采用Tullgren法分离土壤动物为常规操作。

本实施方式还可以根据不同样品变更所加入的蔗糖浓度，15％的蔗糖即可使部分种类土壤动物与土分离，但是由于含水量为85％，需要用较多的酒精清洗以提高保存土壤动物的酒精浓度。提取质量较大的土壤动物可以提高蔗糖的浓度至30％或70％。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二中向烧杯内的粗品中加入9ml的蔗糖溶液。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二中静置25s，倒出液体于培养皿中，重复用蔗糖溶液分离2次。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二中烧杯内的沉淀粗品中若含有剩余的酒精，则加入8～10ml的蔗糖溶液，振荡后土壤动物悬浮于的酒精与蔗糖溶液的相接处，静置20～30s，倒出液体于培养皿中，重复用蔗糖溶液分离1～3次。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。