[发明专利]载紫杉醇纳米微泡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗药物领域，具体的说，涉及一种载紫杉醇纳米微泡及其制备方法。

背景技术

先天性或后天性血管血管狭窄病变经介入手术治疗后，常发生再狭窄。其主要病理基础是血管平滑肌细胞增生迁移所引起的新生内膜增生。微管抑制剂紫杉醇具有微管动力学稳定作用，抑制纺锤体的正常形成，且抑制与细胞分裂有关的跨膜信号转导和基因表达，因此其阻断细胞有丝分裂和增生的效果确切。实验表明紫杉醇可抑制VSMCs的分裂和增殖，在再狭窄模型中能明显减轻新生内膜增生。

紫杉醇为白色或类白色粉末，脂溶性高，在水中的溶解度＜0.004g·L^-1。口服几乎不吸收。现临床应用的紫杉醇注射液由乳浮EL(cremoophor EL，含聚氧乙烯蓖麻油)/无水乙醇(50∶50，v/v)制成的无色粘稠状浓溶液，使用时用5％右旋糖酐或生理盐水稀释成0.3-1.2g·L^-1溶液后静脉滴注3-24h，输注剂量为135-175mg·m^-2，最大耐受剂量(MTD)为3h内输注225-240mg·m^-2。虽然解决了紫杉醇的溶解问题，但由于毒副作用大，患者难以耐受。故开发新的剂型，尤其是供注射的靶向新剂型是目前的研究热点。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种无毒副作用，稳定性好的载紫杉醇纳米微泡及其制备方法。

本发明目的之一是这样实现的：一种载紫杉醇纳米微泡，其关键在于：所述微泡由类脂质双分子层构成膜，内含N₂，所述类脂质双分子层包含亲水基团与疏水基团，所述亲水基团链接紫杉醇，将紫杉醇载入类脂质双分子层构成的膜中，所述类脂质双分子层由卵磷脂、胆固醇、PEG-4000、葡聚糖、司班-80、甲醇、乙醚、3％～6％HSA(人血白蛋白)、紫杉醇标准品、PBS液体的复合构成。

本发明目的之二是这样实现的：一种载紫杉醇纳米微泡的制备方法，其关键在于按如下步骤进行：

(1)将0.1～0.15g卵磷脂，0.04～0.06g胆固醇放入旋转蒸发仪的反应瓶中，加入乙醚溶解卵磷脂和胆固醇；40℃水浴，旋转蒸发仪工作，见反应瓶底部形成一层干燥薄膜结束反应，将乙醚回收入一个瓶子中，妥当保存；

(2)配置0.01M，PH＝7.4的PBS缓冲液；

(3)在步骤(1)反应瓶中加入PBS液，45℃水浴，磁力搅拌器匀速搅拌，同时加入0.4～0.6gPEG-4000，0.07g～0.105g葡聚糖，0.1～0.15ml司班，均质振荡仪振荡6.0×10³r/min  5min，超声空化5min；45℃水浴条件下磁力搅拌器搅拌，同时通入N₂5min；

(4)将(3)中所得粗混悬液依次通过微膜过滤得到多室纳米微泡混悬液；

(5)将1mg紫杉醇标准品溶于1ml甲醇，超声振荡1min，微型漩涡混合器振荡5min，得到1mg/ml的紫杉醇标准品；

(6)取步骤(3)制备的纳米微泡混悬液1ml，加入0.125ml 3％～6％HSA(人血白蛋白)与步骤(5)得到的5mg/ml的紫杉醇标准品0.125ml混合振荡10min，得到最终的载紫杉醇纳米微泡。

上述步骤(2)中缓冲液，由8.0g Nacl；0.20g Kcl；3.6g Na₂HPO₄·12H₂O；0.25g KH₂PO₄加入约800ml-900ml三蒸水在磁力搅拌器搅拌约20min，最终定容到1000ml，后通过LanGe-Pump蠕动泵0.22μm滤膜过滤，15磅20min高压灭菌制得。

上述步骤(4)粗混悬液依次由0.45μm微孔滤膜过滤2次，0.22μm微孔滤膜过滤2次得到多室纳米微泡混悬液。

本发明所得的载紫杉醇纳米微泡进行检测

1.光学显微镜观察

取适量载紫杉醇纳米微泡混悬液，用PBS液体稀释5倍，血细胞计数板计数，计数四个大格，压线的只计左侧和上方的。

微泡数/ml＝4大格总数/4*10⁴计数结果为8*10⁹个/ml

载紫杉醇纳米微泡在光学显微镜下观察形态呈圆球形，规则，大小均匀一致。(见图2)

2.荧光显微镜观察

载紫杉醇纳米微泡的荧光图片→(见图3)