[发明专利]一种提取虫草素的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种提取虫草素的方法。

背景技术

冬虫夏草，又名中华虫草，也称为夏草冬虫，简称虫草。是中国传统的名贵中药材，它是由肉座菌目麦角菌科虫草属的冬虫夏草菌寄生于高山草甸土中的蝠蛾幼虫，使幼虫僵化，在适宜条件下，夏季由僵虫头端抽生出长棒状的子座而形成(即冬虫夏草菌的子实体与僵虫菌核(幼虫尸体)构成的复合体)。然而，世界性冬虫夏草分布天然资源数量很少，在我国，冬虫夏草种类虽然很多，达数百种，但是入药的就只有两种：冬虫夏草菌，北冬虫夏草菌。

蛹虫草(Cordyceps militaris)即北冬虫夏草菌，为子囊菌亚门，麦角菌科、虫草属的模式种。又名北虫草、虫草等。中医认为，虫草入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。现代医药学研究表明蛹虫草富含虫草酸、虫草素、多糖、SOD、硒等多种生物活性物质。其中虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质，对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。具有抗肿瘤、抗菌抗病毒、免疫调节、清除自由基等多种药理作用，有良好的临床应用前景。尤其值得关注的是，美国NCI(国家癌症研究所)对虫草素的开发已经进入临床实验阶段，显示出很好的临床效果和市场前景。

随着我国蛹虫草种植业规模的不断扩大，市场竞争激烈，利润空间变小。依靠出售北虫草子实体初级产品的盈利模式技术附加值低，导致缺乏核心技术支撑的虫草种植业很难取得可持续性的发展。

而且随着产业规模持续扩大带来经济效益的同时也产生了一个严重的问题，即大量虫草采收后的废弃培养基的处置。培养残基(湿)与采收后用于出售的虫草子实体部分(干)达10∶1左右。2010年仅沈阳市的虫草培养基实际排放量已达1万吨。随意排放的培养残基仍然可作为霉菌等有害真菌的优良生长基质，从而造成有害真菌的恶性生长，形成培养残基废料的腐败发霉而产生大量悬浮于空气中的孢子以及可污染地下水的真菌毒素(如强致癌性的黄曲霉素等)物质，不仅会威胁生态安全还能够直接威胁人类的健康。此外，当前虫草种植户将培养残基倾倒于低洼地或沟渠内，然而随着长期大量的排放，很多地方出现了虫草废料围村甚至出现虫草废料无处处置的窘境。严重影响了该产业的可持续性发展，也对生态环境造成了不同程度的破坏。

已经报道的提取虫草素的技术主要采用了较传统的离子交换、沉淀蛋白、有机溶剂脱脂、热提取、重结晶、醇沉淀等繁琐且低效的技术，不仅带来酸、碱、有机溶剂等污染物的排放，还增加了能源的消耗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取虫草素的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种提取虫草素的方法：

(1)虫草素粗提液的制备：蛹虫草固体培养残基或菌体样品经粉碎，与水混合，浸提即为粗提液；或蛹虫草液态培养发酵液过滤后，即得粗提液；将上述所得粗提液过滤后，待用；

(2)粗虫草素的富集：将上述步骤1)所得粗提液过滤，滤液经反相ODS填料柱吸附，而后依次用水、甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生；

(3)虫草素的纯化：将步骤2)所得粗虫草素采用高效液相色谱(HPLC)进行纯化，根据不同的色谱条件即采用不同的色谱柱规格、流速和洗脱液，收集相应的主色谱峰，即得虫草素。

所述步骤(1)中蛹虫草固体培养残基或菌体样品粉碎后与水按体积比1∶8-30的比例混合，混合后经15-50℃浸提2-36小时，浸提后过滤，滤渣重复上述提取2-3次，将所得滤液合并，得粗提液。所述步骤(1)中蛹虫草固体培养残基或菌体样品粉碎后水按体积比与1∶10-20的比例混合，混合后在室温下浸提12-24小时，浸提后过滤，滤渣重复上述提取2-3次，将所得滤液合并，得粗提液。所述步骤(1)中蛹虫草固体培养残基或菌体样品粉碎后水按体积比与1∶20的比例混合，混合后在室温下浸提24小时，浸提后过滤，滤渣重复上述提取1次，将所得滤液合并，得粗提液。所述步骤2)中将上述步骤1)所得粗提液过滤，滤液经反相ODS填料柱吸附，每升滤液添加20-60g的填料，而后依次用5-15个柱体积的水、5-15个柱体积的甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生；所述甲醇水溶液为体积百分比5-30％的甲醇水溶液；DS填料粒径小于等于150μm。

所述步骤2)中将上述步骤1)所得粗提液过滤，滤液经反相ODS填料柱吸附，每升滤液添加30-50g的填料，而后依次用8-12个柱体积的水、8-13个柱体积的甲醇水溶液和甲醇洗脱，同时使柱子再生；所述甲醇水溶液为体积百分比5-20％的甲醇水溶液；ODS填料粒径小于等于75μm。