[发明专利]一种利用解脂耶罗威亚酵母菌株生产赤藓糖醇的工艺

权利要求书

1.一种利用解脂耶罗威亚酵母菌株生产赤藓糖醇的工艺，其特征是是利用自然界中筛选的解脂耶罗威亚酵母菌，经人工扩繁后生产赤藓糖醇，所述解脂耶罗威亚酵母菌菌种培养及利用该菌种生产赤藓糖醇的工艺步骤为：菌种制备→一、二级种子培养→发酵获得发酵液→陶瓷膜过滤→纳滤→蒸发浓缩→活性炭脱色→离子交换→真空结晶→助晶→离心→烘干→筛分→包装；离心所得母液再经纳滤提纯后可达到陶瓷膜滤液的标准，因此可混入陶瓷膜滤液进入下一工序，这样大大提高了产品收率；其具体生产工艺步骤如下：

 (1)菌种的制备

a）将保藏于冰箱冷藏室的斜面菌种转接至新鲜斜面中，然后放置在生化培养箱中28～31℃培养2～3天；

b)将培养的新鲜斜面种子转接于7～8个新配制的茄形培养皿中，放置在生化培养箱中28～31℃培养2～3天，使菌种得到进一步放大培养；

c）制备约7L液体培养基，分装至50～70个干净的1L三角瓶中，每瓶100～140ml，灭菌后冷却待用；

d）在接种瓶中制备好液体种子培养基，冷却；

e）在超净工作台中向培养好的每个茄形培养皿中倒入60～70ml无菌水，并用接种环将斜面上的菌落刮下在无菌水中混匀；

f）按每个三角瓶接种10～15ml的量在超净工作台中进行接种；

g）接种完毕的三角瓶用8层无菌纱布封好口，放置在恒温振荡培养箱中28～32℃震荡培养24h；

h）将培养好的菌种在超净工作台中混入灭菌的接种瓶中待用；

(2)一级种子培养

a）将1m3的一级种子罐冲洗干净，“三路进汽”进行空消；

b）按装液量700L配好种子培养基；

c）先用夹套升温至罐压0.08～0.09mpa，再通过“三路进汽”将罐压升至0.1～0.12mpa进行实消；

d）搅拌并用夹套降温至30～32℃，将接种瓶中的液体菌种“火焰接种”至罐内；

（5）按30～50m3/h通入无菌空气，保持温度28～31℃，搅拌转速150～250r/min，培养20～24h；

(3)二级种子培养

a）对10m3的二级种子罐进行空消，方法同一级种子罐；

b）按装液量7～8m3配好种子培养基；

c）先用盘管升温至罐压0.08～0.09mpa，再通过“三路进汽”将罐压升至0.1～0.12mpa进行实消；

d）搅拌并用盘管降温至30～31℃，注意保持罐压不能为0mpa；

e）对移种管道进行蒸汽湿热灭菌，并由10m3罐用压缩空气进行反吹，将管道温度降至50～60℃左右；

f）通过压缩空气将一级种子罐中的液体种子移至二级种子罐；

g）按250～400m3/h通入无菌空气，保持温度28～31℃，搅拌转速100～150r/min，培养12h；

(4)发酵

a）对100m3发酵罐进行空消，方法同一级种子罐；

b）按装液量70～80m3配好发酵培养基；

c）先用盘管升温至罐压0.08～0.09mpa，再通过“三路进汽”将罐压升至0.1～0.12mpa进行实消；

d）对移种管道进行蒸汽湿热灭菌，自然降温至50～60℃左右；

e）通过压缩空气将二级种子罐中的液体种子移至发酵罐；

f）按1000～1500m3/h通入无菌空气，保持温度29～31℃，前40h搅拌转速为90～100r/min，以后为70～80r/min，发酵60～70h，还原糖降至0.1%后停止发酵；

(5)陶瓷膜过滤

将发酵液用压缩空气排至陶瓷膜循环罐中，用陶瓷膜过滤，得到折光度为15%～18%、赤藓糖醇纯度为75%～92%澄清滤液；

(6)纳滤

陶瓷膜滤液进一步通过纳滤膜进一步去除胶体色素等杂质，以便于后续活性炭脱色及过滤；

纳滤后折光度为10%～13%；

(7)三效浓缩

纳滤后的料液经三效浓缩后折光度为30%～40%左右，由于浓缩，颜色稍变深；

 (8)活性炭脱色

三效浓缩后的料液按固形物加入0.5%～1%的糖类专用活性炭，70～80℃保温1～2h，再经板框过滤，得到透光度95%以上的料液；

(9)离交

按阴——阳——阴的顺序走离子交换柱，阴树脂为南开D296树脂，阳树脂为南开001×7，通过离子交换进一步除盐脱色，最终透光度为100%；

(10)真空结晶

离交后的料液进入真空结晶槽，当从视镜中观察到有微小晶粒出现时，加入晶种，保持温度60～65℃进行结晶，当视镜中的晶粒不再运动时关掉蒸汽，抽真空降温，温度降至40～48℃时将料膏打入助晶槽；

(11)助晶

晶粒在助晶槽中进一步生长，当物料无明显液体存在，温度降至10～35℃左右时，进入离心工序；

(12)离心

将料膏加入离心机中离心5～10min，取出晶体物料，通过直线振动筛进入流化床进行烘干；

(13)烘干

物料进入流化床后，热风温度调至60～70℃，调节冷风风量，保持出料温度不高于35℃；

(14)筛分

晶体赤藓糖醇从流化床出来后进入旋振筛进行筛分，可得到不同粒度的产品；

(15)成品包装

根据客户的要求，选择对应的粒度和包装规格对晶体赤藓糖醇进行包装，成品纯度在99.5%以上，水分在0.16%左右。