[发明专利]糖链衍生物的制造方法、结构解析方法、以及糖链衍生物

说明书

本申请是中国专利申请号201010266780.6，申请日2006年7月19日，发明名称“糖链衍生物的制造方法、结构解析方法、以及糖链衍生物”的分案申请。

技术领域

本发明涉及来自糖链的混合物的糖链衍生物的制造方法、以及糖链的结构解析方法。进一步，涉及根据本发明的糖链衍生物的制造方法制造的新的糖链衍生物。

背景技术

糖蛋白质中的糖链认为具有保持蛋白质的立体结构、获得防止被蛋白酶的分解的抵抗性等作用。最近，逐渐地阐明了糖蛋白质中的糖链参与受精和分化、信号传导、癌化、蛋白质的细胞内输送和生理活性的调节等的生命现象。另外，还阐明了细胞表面的粘接分子和糖蛋白质性激素等的糖链与其功能的关系，总结了糖质科学公会(consortium)构想。现在，糖链功能研究的中心研究以影响其的生合成糖转移酶(糖链基因)为中心，如果考虑糖转移酶还根据基因组情报被保存，利用与其他蛋白质的协调作业，参与生命功能，还需要利用捕捉细胞、组织中表达的糖链的整体图像进行解析的结构糖组学(glyconomics)手法，进行糖链的功能解析。

糖链科学中的结构糖组学的作用是综合地解析在多数生命现象中担负重要作用的糖链识别机理，对功能糖组学是不可缺少的要素。作为结构糖组学所要求的技术的要素，有高综合性、高生产量、高感度以及高精度。

现在，作为糖蛋白质糖链的结构解析法，对从蛋白质切出的糖链进行荧光标记后，利用高效液相色谱(HPLC)或者质谱分析法(MS)的解析的方法成为利用质谱分析的快速技术进步的有力的手段(非专利文献1～4)，唾液酸糖链的分离中，逐渐地专门地利用阴离子交换色谱色谱(非专利文献5)。

【非专利文献1】Biomed Chromatogr.16：103-115(2002)

【非专利文献2】Anal Biochem.206：278-287(1992)

【非专利文献3】Biochem Soc Trans.21：121-125(1993)

【非专利文献4】Chem Rev.102：321-369(2002)

【非专利文献5】Biochim Biophys Acta.705：167-173(1982)

但是，对细胞或组织中的糖链综合解析的场合，由于存在唾液酸和岩藻糖等的非还原末端修饰的多样性和糖链的分枝这样的问题，不能充分地分离混合存在的糖链，不能得到满意的结果。特别地，如果使用离子交换色谱等，由于没有特异的分离能力，不仅不能获得充分的分离，而且分离操作后必须要进行脱盐处理，可以说并不是实用的方法。

因此，对这些的糖链不均一性情报有担心，同时迫切希望对细胞、组织可以详细进行特征糖链结构解析的实用的手法。

本发明的课题在于，提供从像细胞或者组织中的糖链那样混合存在的各种的糖链的状态分离、获取各糖链的手段。

另外，本发明课题在于，提供对于分离的各糖链化合物的结构进行解析的手段。

进一步，本发明的课题在于提供新的糖链衍生物。

发明内容

本发明涉及以下的发明。

1.糖链衍生物的制造方法，是从糖链混合物制造糖链衍生物的方法，其特征在于，包括下述工序：(a)在糖链混合物中的糖链上导入脂溶性基，得到糖链衍生物的混合物的工序、以及(b)将该糖链衍生物的混合物用5-羟色胺(serotonin)亲合柱色谱法进行处理的工序。

2.上述1记载的糖链衍生物的制造方法，其中在(b)工序之后具备(c)采用氨基柱或者酰氨基柱的正相色谱法进行处理的工序。

3.上述记载的糖链衍生物的制造方法，其中，在(c)工序之前，具备(d)用糖水解酶进行处理的工序。

4.糖链的结构解析方法，是解析糖链混合物中的糖链的结构的方法，其特征在于，具备以下工序：(a)在糖链混合物中的糖链上导入脂溶性基，得到糖链衍生物的混合物的工序、(b)将该糖链衍生物的混合物用5-羟色胺亲合柱色谱法进行处理的工序、以及(e)用质谱分析法进行处理的工序。

5.上述记载的糖链的结构解析方法，其特征在于，在(b)工序之后，具备(c)通过采用氨基柱或者酰氨基柱的正相色谱法进行处理的工序。

6.上述记载的糖链的结构解析方法，其中，在(c)工序之前具备(d)用糖水解酶进行处理的工序。

7.上述4记载的糖链的结构解析方法，其中，质谱分析法是利用MALDI-TOF MS的质谱分析法。