[发明专利]Toll样受体7和8激动剂及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种激动剂，特别涉及一种Toll样受体7和8(TLR7/8)激动剂及应用。

背景技术

对于病毒和肿瘤，直至目前，人们没有很好的药物来应对，对于非自限性病毒和多种肿瘤，机体免疫系统仍是主要的防御力量。近年来，一些免疫调节剂，比如：肿瘤坏死因子a(TNF-a)，自介素12(IL-12)和白介素6(IL-6)等细胞因子，被用于抗病毒和抗肿瘤治疗中，疗效比较理想，但是，价格昂贵，难以联合使用。

自从90年代末期，Toll样受体(TLR)发现以来，人们逐渐认识到多种TLR家族成员处于机体免疫前线，能够特异性地识别不同的病原模式分子，启动固有免疫，来阻击外源性病原微生物的入侵和破坏。这些病原模式分子主要包括脂蛋白、脂多糖和核酸结构的碎片等，由此可见，虽然病原微生物中的外壳蛋白可能早期接触机体免疫系统，而核酸序列可能在病毒复制繁殖后，才被机体识别，因此，机体免疫系统往往处于“被动”防御的状态。为了提高机体的“主动”防御机制，国内外学术界认识到，根据TLR识别特征，来操控免疫调节，增进免疫力，可以提高抗病毒和抗肿瘤的效果。

2004年Heil小组在《科学》杂志上发表文章，首次提出了病毒中一组富含GU结构的单链RNA能够被机体免疫细胞上的TLR7和TLR8特异性地识别，特别是，其中被称为ssRNA40的序列，结构为GCCGUCUGUUGUGUGACUC，能够刺激以TNF-a，IL-12和IFN-a为主的多种细胞因子高水平释放，为细胞免疫治疗提供了新的策略。

那么，科学利用TLR7/8识别病毒病原模式分子，并介导多种细胞因子释放的特性，有利于增进机体免疫力；同时，TLR7/8的天然配基(核苷酸片段)相对于细胞因子，在价格上要便宜，质量便于控制，安全性好，因此，寻找高效的TLR7/8天然激动剂或类天然激动剂，对于临床抗病毒和抗肿瘤治疗都具有积极的意义。

申请人长期从事Toll样家族相关先天免疫研究，目前，针对TLR7/8识别病毒单链RNA特征的规律，利用生物信息学技术，高通量分析了富含GU结构的RNA基序，包括不同侧翼碱基的组合排列特征序列，通过实验筛选验证，成功获得了本发明的ssRNA120，其免疫效率在先前ssRNA40的两倍以上，可作为未来抗病毒和抗肿瘤的辅助治疗药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Toll样受体7和8激动剂及用途。所述激动剂能特异性作用于TLR7/8，促使机体免疫细胞高效释放TNF-a，IL-12和IFN-a等细胞因子，从而上调免疫功能，可用于抗病毒和抗肿瘤的辅助治疗。

本发明的技术方案是：

Toll样受体7和8(TLR7/8)的强力激动剂，所述强力激动剂包含GUCUGAGUGUGUUCUUG的核苷酸序列片段。

上述激动剂在制备治疗抗病毒和抗肿瘤药物中的用途。

本发明所述激动剂基本结构为5`-GUCUGAGUGUGUUCUUG-3`的核苷酸序列片段，其中富含GU结构，以及相应的侧翼碱基组合排列特征，可通过硫代骨架修饰来稳定其结构。本发明所述激动剂能与TLR7/8发生特异性结合，促使机体免疫细胞高效释放TNF-a，IL-12和IL-6等细胞因子，从而上调免疫功能。其效能是以往报道的ssRNA40的两倍以上。

本发明所述激动剂的制备过程：按上述核苷酸序列，通过普通RNA化学合成、硫代修饰并纯化的方法获得。所述激动剂剂型为粉末(水溶性)，使用时，经HBS缓冲液稀释，并与DOTAP(阳离子脂质体)形成混合液(按1∶2体积比，详见实施例1)。该激动剂可在体外诱导细胞活化后，进行回输疗法，或通过注射剂或输液剂等形式给药。可分高中低三个剂量，酌情给药：针对体外诱导使用时，高剂量为25μg/1x10⁶个靶细胞/ml，中剂量为10μg/1x10⁶个靶细胞/ml，低剂量为5μg/1x10⁶个靶细胞/ml；刺激时间24小时后，进行回输。针对成人可经静脉体内诱导时，高剂量10mg，中剂量5mg，高剂量2.5mg。可按每天一次，每周为一个疗程，实际疗程次数可按临床具体情况而定。

由于本发明所述激动剂的作用靶点明确、活化效率高、安全性好的优点，在免疫调节过程中，能有力增进机体免疫功能，可作为抗病毒、抗肿瘤的辅助治疗药物，以及相关研究实验用的试剂，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为ssRNA120通过TLR7刺激细胞因子TNF-a释放状况；