[发明专利]一种微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法

权利要求书

1.一种微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

1)配制含有非极性有机污染物的Vero细胞培养基；

2)采用步骤1)配制的培养基对Vero细胞进行受试；

3)受试后，除去培养基，在细胞培养皿中加入PI染液，于暗处室温下孵育；

4)将孵育后细胞培养皿中的PI染液吸出，测所吸出的PI染液的荧光度；通过计算PI摄入率来判断细胞膜的受损程度，进而判断非极性有机污染物的细胞毒性大小。

2.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的非极性有机污染物选自2，4，6-三氯苯酚或全氟辛烷磺酰基化合物中的一种或两种。

3.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的非极性有机污染物的浓度为0～50mg/L的培养基。

4.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的步骤2)的受试包括以下步骤：将Vero细胞以10⁴～10⁶个/mL的密度接种到培养皿中，加入步骤1)所述的培养基，培养18～24h。

5.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的步骤3)包括以下步骤：加入1～5mL浓度为10～100μg/mL的PI染液，每个培养皿中加入的PI染液量一致，于暗处室温下孵育10～20min。

6.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的步骤3)中加入PI染液前，进一步包括用磷酸盐缓冲液冲洗细胞的步骤。

7.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的步骤4)包括以下步骤：将PI染液分别加入96孔板中，100～200μL/孔，用酶标仪测其荧光度，其中：酶标仪激发波长为530nm，发射波长为620nm。

8.根据权利要求1所述的微量非极性有机污染物毒性的定量检测方法，其特征在于：所述的PI摄入率计算公式如下：各浓度污染物受试细胞，PI摄入率即进入细胞的PI染液的比例；

PI摄入率＝[(U₀-U)/U₀]×100％

无细胞空白时的PI的荧光值为U₀，未进入细胞的剩余PI量的荧光值为U。