[发明专利]前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物及用途

权利要求书

1.一种前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，是通过包括以下步骤的方法获得的：在环噻唑霉素前体肽基因cltA内插入两个BglII和SpeI限制性内切酶的酶切位点；用突变引物与双酶切产物相连接构建来实现原位点突变环噻唑霉素前体肽基因cltA；然后通过在链霉菌的模式中的异源表达获得环噻唑霉素类似物。

2.根据权利要求1所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，所述在环噻唑霉素前体肽基因cltA内插入两个BglII和SpeI限制性内切酶的酶切位点的方法，具体包括如下步骤：

(1)选用pMD-18T载体，与PCR扩增出来含有环噻唑霉素前体肽基因cltA的部分环噻唑霉素基因簇的3kb片段相连接，PCR扩增产生的片段两端含有限制性内切酶SnaBI和SacI酶切位点，切下再与pJTU4892相连接；

(2)通过PCR-Targeting的方法将质粒pJTU4892中的aac(3)IV阿泊拉霉素抗性基因替换成neo卡那霉素抗性基因，得到质粒pJTU4895；

(3)用限制性内切酶SnaBI和SacI从含有BglII和SpeI识别位点的重组质粒pMD-18T-3kb切下3kb的片段，与用限制性内切酶SnaBI和SacI酶切处理过的载体pJTU4895相连接，转化大肠杆菌DH10B，获得还有限制性内切酶BglII和SpeI识别位点的质粒pJTU4896；

(4)用XbaI和EcoRI酶切处理pJTU4896的片段与用XbaI和EcoRI酶切处理pSET152的片段连接构建得到质粒pJTU4897，该质粒pJTU4897含有aac(3)IV阿泊拉霉素抗性基因，并且含有限制性内切酶BglII和SpeI识别位点。

3.根据权利要求1所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素抗生素类似物，其特征在于，所述原位点突变环噻唑霉素前体肽基因cltA具体为突变了环噻唑霉素前体肽基因的7个位点中任一位点或两位点的氨基酸残基，所述7个位点为C3、T4、S5、T6、G7、T8和P9位。

4.根据权利要求1所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，所述异源表达是在链霉菌的模式菌株变铅青链霉菌Streptomyces lividans 1326中的异源表达。

5.根据权利要求1所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，所述环噻唑霉素类似物对应的突变株为C3S、T4D、T6D、T6V、T6G、T6S、T6C、G7A、G7S、T8D、T8S、P9H、P9A或T68D。

6.根据权利要求5所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，所述环噻唑霉素类似物对应的突变株为T6D，T6S，T6V，T6G，T8S或P9A。

7.根据权利要求6所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，所述环噻唑霉素类似物对应的突变株为T6S，T6V，T6G或T8S。

8.根据权利要求7所述的前体肽基团突变产生的环噻唑霉素类似物，其特征在于，所述环噻唑霉素类似物的结构式为式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示，

9.权利要求6所述的环噻唑霉素类似物在制备抑制玉米小斑生长的抑制剂中的用途。

10.根据权利要求9所述的制备抑制玉米小斑生长的抑制剂中的用途，其特征在于：所述抑制剂采用的环噻唑霉素类似物对应的突变株为T6S，T6V，T6G或T8S。