[发明专利]一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术与现代农业技术领域，具体涉及一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法。

背景技术

    黄连木(pistacia chinensis Bunge)是一种重要的多年生木本油料植物，分布范围广，可在荒山荒地和沙地种植，适宜大面积造林，而且种子含油率高达40%以上，用黄连木种子生产的生物柴油是清洁的可再生能源，是优质的石油柴油代替品，已经被确定为未来生态能源林建设和生物质柴油产业优先发展树种。由于其被作为生物质能源树种的前景看好，目前针对黄连木的研究越来越多，但基本都是集中在栽培技术等方面，而对于其组织培养及遗传转化方面的研究较少；目前，国家对于发展生物能源林建设愈来愈重视，通过分子手段来进行遗传改良是一种较快的方式。然而，黄连木存在种子消毒不易彻底、萌芽缓慢、发芽率低等问题，因此需要一种既能较好的去除其污染又能提高发芽率的方法。通过使用一般的消毒方式效果很是不理想，因此开发一种低污染、高发芽率的方法更加显得迫在眉睫。

发明内容

黄连木无菌外植体的获得是进行组织培养及遗传转化研究的基础。然而，由于黄连木种子消毒不易彻底，特别是储存时间长或梅雨季节更是甚难，严重影响了其研究进度。因此，发明一种不仅消毒效果好而且发芽率高，获得的无菌苗比较健壮的方法是本发明的重要特征。

本发明的目的在于针对黄连木普通消毒效果不理想的问题，设计一种不但消毒效果好而且获得的无菌苗发芽率高、生长健壮的方法。

为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：

一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于：将去除外壳的黄连木种子经乙醇和次氯酸钠消毒处理，然后将种子浸泡在水中进行超声处理，冲洗干净后接种在种子萌发培养基上，获得无菌健壮的实生苗。

所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于：所述的乙醇和次氯酸钠消毒处理是指将种子先用65-75%的乙醇处理1分钟，无菌水冲洗一次，然后用15-25%的次氯酸钠处理10分钟。

所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于：所述的超声处理是指将种子浸泡在无菌水中，然后放在温度设置在18-22℃的超声仪器中处理8-12分钟，之后无菌水清洗干净。

所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于：所述的萌发培养基是指：1/2MS+6-BA2.0 mg/L+SNP15 mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂8 g/L，pH调至5.8-6.0。

本发明的有益效果：

本发明巧妙的将普通消毒与超声波处理相结合，通过他们之间的协同作用，显著降低了种子内生菌的污染率，同时提高了种子的发芽率；将消毒干净的种子接种在特定培养基上，获得了生长健壮的无菌苗。

具体实施方式

实施例1：黄连木种子内生菌去除及快速萌发的具体操作方法如下：

1、将去除外壳的黄连木种子首先用纯水清洗几次，然后用70%的乙醇处理1分钟，无菌水冲洗一次，接着用20%的次氯酸钠处理10分钟，期间不停地摇动，无菌水冲洗3-4次；

2、经冲洗干净的种子浸泡在无菌三角烧瓶中，放入超声仪器20℃超声处理10分钟，之后无菌水冲洗至干净；

3、将消毒干净的种子接种在萌发培养基1/2MS+6-BA2.0 mg/L+SNP15 mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂8 g/L，一周左右即可获得无内生菌污染、发芽率高且生长粗壮的无菌实生苗。