[发明专利]一种缺失型α地中海贫血-2基因及其检测试剂盒和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的致病基因及其检测试剂盒，特别涉及一种缺失型α地中海贫血-2基因及其检测试剂盒。

背景技术

地中海贫血（“地贫”）是一常见的常染色体隐性遗传病，是世界上最常见的人类单基因遗传性血液病之一，被世界卫生组织列为危害人类健康的6种常见病之一。该疾病是由于珠蛋白基因或其相关调控序列的缺失或点突变，导致珠蛋白肽链合成障碍，使得组成珠蛋白的α链和β链合成失去平衡而导致的溶血性贫血病。根据受累珠蛋白链的不同，分为α地中海贫血与β地中海贫血。

人的α类珠蛋白基因位于16p13.3，长约40kb，整个α类珠蛋白基因簇共由7个基因组成，包括4个可编码基因和3个假基因：端粒-ξ-ψξ1-ψα2-ψα1-α2-α1-θ-着丝粒。珠蛋白族基因表达受着严格的时空调控，其中ξ-珠蛋白基因在胚胎期表达，α2、α1和θ珠蛋白基因在胎儿和成人期表达。

在我国大于80%的α地中海贫血是由于编码α-珠蛋白的α基因（α2和/或α1）的大片段缺失引起，而这其中最为常见的又为--^SEA，-α^3.7与-α^4.2 3种类型，但却不仅限于此，一些新的缺失如：--^11.1、--^HW、-α^2.7、-α^2.4、-α^27.6也相继被发现。这些发现我国的α-地中海贫血基因谱特别广。这也提醒我们在地贫的基因筛查时需特别谨慎。

目前对于α-地贫的诊断主要依靠基因检测，即检测到α-地贫基因而确诊。检测方法有多重Gap-PCR、多重连接酶依赖的探针扩增技术（MLPA）、实时荧光定量PCR、斑点杂交、直接基因测序等方法。

要进行地贫的全面基因筛查，需要找到尽可能多的致病基因。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的α-地中海贫血2基因。

本发明所采取的技术方案是：

缺失型α地中海贫血-2基因-α^2.8，其序列如SEQ ID NO：1所示。

一种检测试剂盒，含有可识别上述基因的试剂。

优选的，检测试剂盒含有可特异性识别上述基因或其产物的试剂。

缺失型α地中海贫血-2基因-α^2.8的检测方法，包括如下步骤：

（1）提取待测患者外周血的基因组DNA；

（2）以基因组DNA为模板进行PCR，得到PCR产物；

（3）对PCR产物作琼脂糖凝胶电泳分析检测出扩增产物；

（4）对检测出阳性PCR产物进行直接基因测序，对测序结果与参考序列NG_000006.1进行比对，确定断裂位点（NG_000006.1: g.32486-35380 del 2895）。

优选的，PCR反应中的引物序列为：Primer F: GGACCTCCTGGTGCTTCTGCTTCCT （SEQ ID NO：2）；Primer R：CTCCCTGTCTGCCACCCTCTTCT （SEQ ID NO：3），PCR产物直接测序的引物序列为：SEQ_2R: GGGCCACCATGCCCGGCTGATT（SEQ ID NO：4）。

本发明的有益效果是：

本发明首次在人类基因组中分离并鉴定得到的α-地贫基因。该致病基因缺失了整个α2基因，可导致α-珠蛋白表达产物量降低。本发明的新基因为更为全面的进行地贫筛选创造了条件。

使用本发明的检测试剂盒，可以检测出这一新型基因缺陷。

附图说明

图1泳道2是样本患者的多重Gap-PCR 检测中国人常见的3种缺失型α-地中海贫血基因结果，其中长度为1800bp的条带是α-珠蛋白正常基因的扩增产物，长度为2000bp、1600bp、1300bp的条带分别是-α^3.7、-α^4.2、--^SEA缺失型扩增产物；