[发明专利]一种番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的检测方法

说明书

发明领域

本发明属于食品安全检测领域，具体的，本发明涉及一种番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的检测技术领域。

背景技术

链霉素(Streptomycin)和双氢链霉素(Dihydrostreptomycin)属于氨基糖苷类抗生素中的常用药物，是从放线菌属的灰链丝菌(Streptomyces griseus)的培养液中提取出来，能够有效地抑制肽链的延长和细菌蛋白质的合成，消灭革兰氏阴性好氧菌及部分革兰氏阳性菌。对多种植物细菌和真菌性病害，特别是对细菌性病害均有良好的防治效果，如可以有效的防治西红柿青枯病、西红柿溃疡病、大白菜软腐病和黄瓜细菌性角斑病等。但是，该抗生素对人有一定的毒副作用，如果食品中残留过量的链霉素，则会对人体造成严重危害，如损伤前庭神经和耳蜗神经导致听力减退，链霉素还具有潜在的致畸、致突变和致癌作用。日本肯定列表对于番茄中链霉素和双氢链霉素总量的限量为0.3mg/kg，美国对于番茄中链霉素的限量是0.25mg/kg。目前，我国是世界第一大番茄制品出口国，番茄制品是我国重要的农产品出口品种之一。经调查，我国多数地区在农业生产中都使用上述抗生素，这就极大的增加了我国番茄制品的出口风险。如实现对番茄制品中链霉素和双氢链霉素残留量检测方法的建立，对提高我国番茄制品检测技术水平，促进我国农产品对外出口，打破国际贸易壁垒等方面具有重要意义。

目前，国内外针对链霉素和双氢链霉素残留的检测技术已有大量的研究，常用的检测方法有酶联免疫法、分光光度法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法等。酶联免疫法易产生假阳性或假阴性结果，常用于筛查分析；液相色谱法不能有效分离链霉素和双氢链霉素，且灵敏度较低，不能实现链霉素和双氢链霉素的同时测定和确证分析，因而难以解决其混合残留的问题；液相色谱-串联质谱法是目前的主流检测方法，但文献报道的相关方法前处理比较复杂，常需要经过两次固相萃取小柱的净化，试剂消耗量大，并且需要采用离子对试剂，易污染质谱检测器，使质谱的重现性和灵敏度变差。目前，用液相色谱-质谱联用法同时检测番茄酱中链霉素与双氢链霉素残留量的方法还未见报道。番茄酱中番茄红色素的较高，且还含有矿物质、碳水化合物、氨基酸、核黄素和烟酸等物质。上述物质对于链霉素和双氢链霉素的液相色谱质谱法的测定影响很大，净化条件不佳时，待测物的峰型很差和灵敏度很低。净化处理是链霉素和双氢链霉素测定的难点。

发明内容

针对现有技术中未见报道专门对番茄酱中链霉素和双亲链霉素测定的技术现状。本发明的目的在于提供了一种番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的快速，经济、灵敏、准确、耐用的确证和定量方法。

本发明具体提供了一种番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量检测的确证和定量方法。

本发明的技术方案：通过建立了LC-MS/MS测定番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的方法，通过提取液提取番茄酱样品中的链霉素和双氢链霉素，离心，上清液用分散固相萃取初净化和串联双柱固相萃取净化相结合的方法来净化待测物，氮气吹干后，溶解残渣，供LC-MS/MS测定。

本发明具体提供了一种番茄酱中链霉素和双氢链霉素残留量的测定方法，番茄酱经前处理净化后，用高效液相色谱-串联质谱测定，其前处理步骤如下：

称取番茄酱样品于离心管中，加入提取液于样品中，涡旋，震荡，超声，离心后，取7.0ml上述离心后的上清液于15ml的离心管中，同时往离心管中加入0.8g的硅藻土，充分涡旋，震荡，离心后，取4.0ml上述离心后上清液用串联亲水亲脂平衡固相萃取柱和弱阳离子交换固相萃取柱来同时净化；串联亲水亲脂平衡固相萃取柱为柱1；弱阳离子交换固相萃取柱为柱2；依次用5.0ml甲醇，5.0ml水分别活化亲水亲脂平衡固相萃取柱和弱阳离子交换固相萃取柱，用6.0ml的磷酸盐缓冲溶液淋洗柱1和柱2，依次加入6.0ml的水和1.0ml的甲醇淋洗柱2，用含3％甲酸的甲醇溶液6.0ml洗脱柱2中的待测物，氮气吹干，用0.5ml含0.2％甲酸的乙腈和水的溶液溶解残渣，其中，乙腈∶水＝70∶30，供LC-MS/MS测定。