[发明专利]中成药和保健食品中掺杂褪黑素的快速测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及褪黑素成分的检测方法，具体是检测中成药和保健食品中，尤其是用于检测镇静安眠类中成药和保健食品中是否添加褪黑素的方法。

背景技术

目前市场上存在许多种解决失眠问题的中成药和保健食品，宣传其成分主要为纯植物或者纯中药，不含有助眠功效的西药成分或者激素类成分等。

褪黑素又称松果体素，化学名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺，是人体大脑内松果体分泌的一种吲哚胺类激素。其分泌随着光照的增加而减少，故又被称为黑暗荷尔蒙。褪黑素主要用于调节人体的清醒和睡眠周期，诱导生理睡眠，以及抗衰老等。

褪黑素是一种内源性激素，有研究表明，大量使用褪黑素可能会引发呼吸问题，产生宿醉效应，同时褪黑素会影响某些镇静安眠药物如氯硝西泮的作用。在欧洲，褪黑素的服用周期、适用人群以及剂量均有严格限制。在美国，褪黑素以膳食补充剂的形式销售，其说明书上需明确标示含量及使用剂量。在我国，褪黑素作为保健食品使用，有明确的法律规定：日服用剂量为1～3mg，不得添加除维生素B6以外的其他成分，注意事项中应注明从事驾驶、机械作业或危险操作者，不要在操作前或操作中食用和自身免疫症(类风湿等)及甲亢患者慎用。故服用褪黑素最好遵循医嘱，明确使用剂量，儿童使用更需要谨慎。但是，一些不法分子利用褪黑素的镇静、催眠的良好作用和中成药和保健食品成分复杂的特点，在镇静催眠类中成药和保健食品中擅自添加褪黑素，夸大宣传功效，抬高价格；而使得食用者无法明确意识到自己的服用剂量，从而引发不良后果，给人民群众的身体健康造成了严重危害。特别在广大的农村和经济欠发达的中小城市，由于这些地区缺乏必要的检验仪器，加上技术监管能力薄弱，给了不法分子更多的造假和添加之机，导致大量假药劣药出现，造成了中药制剂和保健食品市场的混乱。

检验镇静安神类中成药和保健食品中是否添加褪黑素的现有方法主要有以下四种：

1、薄层色谱法

样品中的待测成分经过甲醇提取，所得的供试品溶液与对照品溶液点在硅胶薄层板上，用展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视。在展开剂的作用下，由于不同物质的迁移速度不同，不同物质在薄层色谱板的不同位置以斑点的形式出现，根据待测样品是否在与对照品相应的位置上出现斑点这一实验所得的现象来判断待测样品是否含有目标成分。如果供试品溶液薄层色谱图与褪黑素对照品相应的位置上出现斑点，则提示样品中可能含有褪黑素成分。

薄层色谱法的优点是不需要昂贵的分析仪器。该法缺点是：(1)色谱分辨率较低，中药制剂成分复杂，干扰因素多，易将某些共存成分误判为褪黑素成分，某些共存成分如果量较大且色谱迁移值与待测成分接近，则会干扰目标成分的检出。(2)色谱展开和晾干的时间长，不足以满足快速测定的要求。(3)薄层色谱板需要烘干并干燥存放，环境温度和湿度对分离效果的影响较大。(4)需要有固定的场所，不适合作流动性大的现场检测。(5)要求实验人员有较好的经验。

2、高效液相色谱法

高效液相色谱法是常用的现代分析方法，在相同的色谱条件下，不同的物质有不同的色谱保留时间。在相同的色谱条件下褪黑素对照品溶液与样品提取所得供试品溶液分别进样，根据色谱峰保留时间可判断待测样品是否含有褪黑素成分。

高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高、灵敏度高。缺点是：(1)仪器价格昂贵，样品前处理时间长，色谱柱易受污染，分析成本高；(2)当共存的色谱峰保留时间与褪黑素色谱峰保留时间接近时容易做出错误的判断；(3)仪器对使用环境的要求高，需要固定放置，不适合流动性大的现场检测。

3、高效液相色谱-质谱联用法

以高效液相色谱仪作为分离器、质谱仪作为分析器的高效液相色谱-质谱联用法适合于成分复杂、背景干扰严重的样品分析，这种分析方法可提高检测结果的可靠性。

高效液相色谱-质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱更高、操作更加复杂的分析方法。仪器对使用环境的要求更高，需要固定放置，不适合做流动性大的现场检测。这些检验只能在少数实验室中进行，不易推广使用。

目前中成药和保健食品行业尚无利用理化反应快速筛查褪黑素的方法发布，对于药店和基层药检单位，开发中成药和保健食品中擅自添加褪黑素的快速筛查方法，在监管现场对样品进行快速分析，为中成药和保健食品监管及时提供证据，打击不法分子的造假行为和保障人民群众的用药安全是非常必要的。

发明内容