[发明专利]以大花香水月季茎段为外植体的植株再生方法

权利要求书

1.一种以大花香水月季茎段为外植体的植株再生方法，其特征在于经过下列各步骤：

A．选择腋芽饱满的大花香水月季中部枝条，并切成单芽茎段，经消毒处理后，接种在1.0～2.0mg/L 6-BA + 0.1～0.15 mg/L NAA + 6.2～7.0g/L琼脂 + 30g/L蔗糖，且pH值为5.8～6.1的MS基本培养基上，直至腋芽萌发后，再接种在1.0mg/L 6-BA + 0.01～0.02 mg/L NAA + 6.2～7.0g/L琼脂 + 30g/L蔗糖的MS基本培养基上，于23～26℃、光照强度2000～3000Lx，光照时间14h/d的条件下，进行继代培养25～35天，得到大花香水月季的无菌苗； 

B．将步骤A所得大花香水月季无菌苗的叶片切下，在小叶主脉处横切出伤口，叶背向下接种到下列愈伤诱导培养基上：MS基本培养基 + 5～9 mg/L 2,4-D + 30g/L葡萄糖 + 2.5～3.0g/L植物凝胶，pH值为5.8～6.1，并在黑暗条件下培养，5～10天切口处膨大，可以观察到愈伤组织；

C．将步骤B所得愈伤组织接种到下列愈伤分化培养基上：MS基本培养基+1.0～5.0 mg/L TDZ + 1.0 mg/L GA₃ + 0.1mg/L NAA +0～1.0 mg/L 6-BA+ 30g/L葡萄糖 + 2.5～3.0g/L植物凝胶,pH值为5.8～6.1，并在黑暗条件下培养10～15天，之后在光照强度为2000～3000Lx，光照时间为14h/d条件下，培养10～15天，使愈伤组织分化出不定芽；

D．将步骤C得到的不定芽接种到下列壮苗培养基上：MS基本培养基+1.0mg/L 6-BA +0.01～0.02mg/L NAA +0.3～0.5mg/L GA₃ +30g/L蔗糖+6.2～7.0g/L琼脂粉，pH值为6.0，培养至长出2～3cm高后，接种到下列生根培养基上：1/2MS基本培养基(大量元素减半)+ 0.1～0.3mg/L NAA +30g/L蔗糖+6.2～7.0g/L琼脂粉，pH值为5.8～6.1，并在光照强度为2000～3000Lx条件下，光照时间为14h/d条件下，进行生根培养，20～30天后即得植株。

2.根据权利要求1所述的植株再生方法，其特征在于：所述步骤A的单芽茎段的消毒处理是：用0.1%升汞灭菌8～10min，再用无菌水冲洗干净，即可。

3.根据权利要求1或2所述的植株再生方法，其特征在于：所述步骤B的愈伤诱导培养基中的2,4-D优选8 mg/L。

4.根据权利要求1或2所述的植株再生方法，其特征在于：所述步骤C的分化培养基中的TDZ优选3.0 mg/L。

5.根据权利要求1或2所述的植株再生方法，其特征在于：所述步骤C的分化培养基中的6-BA优选1.0 mg/L。

6.根据权利要求1或2所述的植株再生方法，其特征在于：所述步骤D的壮苗培养基中的GA₃优选0.3 mg/L。

7.根据权利要求1或2所述的植株再生方法，其特征在于：所述步骤D的生根培养基中的NAA优选0.1mg/L。