[发明专利]同时检测多种亚型猪流感病毒的多通道微流控芯片

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时检测多种亚型猪流感病毒的多通道微流控芯片，该猪流感病毒诊断器件是基于抗原/抗体特异性反应来诊断猪流感病毒抗原的专用微流控芯片，属于分析测试领域。

背景技术

猪流感病毒(Swineinfluenza vires，SIV)属于正粘病毒科甲型流感病毒属(Influenza virus A)，是单股负链RNA病毒，其基因组由大小不等的8个独立片段组成。甲型流感的亚型是根据血凝素(Hemagglutinin)和神经氨酸(Neuraminidase)的不同来分的，其可分为15种不同的H抗原亚型和9种不同的N抗原亚型。目前造成世界流行SIV血清型亚型主要有3种：H₁N₁、H₃N₂和H₁N₂。最近以墨西哥和美国为主的全球甲型H₁N₁流感的暴发更加坚定了对SIV的研究和防控。因此发展快速诊断和确诊SIV的方法非常迫切，在减少世界经济损失和提高人类卫生健康方面，都具有深远的意义。

目前传统的猪流感诊断方法，大致可分为四种：一是病毒分离，病毒分离被视作实验室诊断的标准，但缺点是所耗时间较长，而且只能在专门的实验室进行，往往不能及时防制措施提供依据；二是检测病毒核酸，最常用的是反转录PCR，若利用多对特异性引物进行多种PCR，可以实现不同亚型SIV同时检测，但影响因素多、操作复杂、耗时，同时需要专业技术人员进行操作；三是检测病毒蛋白，如荧光抗体方法和免疫组化方法，这类方法的虽可满足快速诊断的需要，但其灵敏度低、特异性不强；四是利用免疫学方法检测血清中的特异性抗体，如酶联免疫吸附试验(ELISA)；虽有较高的灵敏度和特异性，但也有少量的假阴性和假阳性。

电化学免疫传感器具有自动化程度高、廉价、易制备、快速灵敏等独特优势，配合免疫反应的高效专一，非常适合构建重大传染病多重免疫分析检测的分析仪。有“生命科学集成电路”之称的微流控芯片(lab-on-chip)是构建微型化、集成化的电化学免疫传感器的理想技术。微流控芯片技术是将采样、预处理、加试剂、反应、分离、检测等集成在一块微芯片上完成的一门前沿技术，具有分析速度快、信息量大、试剂消耗少、污染小、操作费用低、仪器使用简便等优点。且非常适合工业化生产。微流控技术代表着21世纪分析仪器走向微型化、集成化的发展方向。构建适合于重大传染病检测的微流控安培检测芯片具有以下优势：(1)通过微加工技术很容易在芯片上集成多个检测通道和检测电极，做到多目标物同时分析，技术可行性高。(2)通过微流动注射技术，样品在管路中流动保证了电极表面时刻更新，较好克服了电极易被污染，造成假阳性率高、结果平行性差等问题。(3)微流控传感器上管路直径只有μm级，反应池体积也只有μL级，分析时所需试剂用量极少，分析物到达电极表面的扩散距离短、因此可以大大减少温育时间，实现快速联检目标。(4)目前微流控传感器多基于光学检测系统，仪器昂贵体积大，全集成很难，而且检测成本很高，限制了其推广。而传感器中采用电化学检测，体积小、自动化程度高、成本低。

目前，在微流控芯片技术领域，利用猪流感病毒(SIV)多种亚型的特异性抗体来同时检测、快速诊断多种亚型SIV抗原的相关技术和方法尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，在微流控芯片技术这样一个总的技术框架内，研发出一种能够利用SIV多种亚型的特异性抗体来对相应的SIV抗原进行同时检测、快速诊断的专用微流控芯片。