[发明专利]靶向人CD147小分子RNA干扰序列及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及抑制宫颈癌细胞增殖，诱导细胞凋亡及增强细胞对化学药物敏 感性的小片段RNA类药物及其用途。

背景技术

RNA干扰具有强大的抑制基因表达的效应和高度的特异性，而引起生物医 学界几乎所有研究领域的广泛兴趣。RNAi技术迅速从实验室推进到临床。首先， 人基因组项目的完成使得有可能设计能沉默任何基因的小干涉RNA(siRNA)。 其次，我们认识到许多新的靶标对小分子药物或生物药物是难以接近的。因此， 设想出一种在mRNA水平上影响这些靶标的方法就具有极大的吸引力。

RNAi技术在很短的时间内迅速从体外细胞、动物试验发展到临床试验，第 1个临床试验是由Acuity Pharmaceuticals公司于2004年底开发的靶向VEGF 的siRNA用于治疗老年性黄斑变性(AMD)，并且发展迅速。siRNA作用于癌 症的首例临床研究是Calando公司的用于治疗实体肿瘤的CALAA01，已于2008 年5月获FDA批准进入I期临床。CALAA01是包被在环糊精-转铁蛋白-AD-PEG 纳米颗粒中的靶向核糖核苷酸还原酶M2亚基的siRNA，通过降低核糖核苷酸 还原酶M2亚基的表达从而起到抑制肿瘤生长，缩小肿瘤体积的作用[51]。啮齿 类及灵长类动物的研究显示，CALAA01具有抗肿瘤活性且安全性良好，I期临 床试验中36例实体瘤患者接受为期2I天的静脉注射循环治疗[52]。2009年3 月，Alnylam公司也开展了用于治疗肝癌的RNA干扰药物ALN-VSP02的I期 临床试验[53]。该药物是包被在脂质体中靶向KSP(纺锤体驱动蛋白)和VEGF (血管内皮生长因子)的siRNA，通过阻滞细胞周期和抑制肿瘤血管生成以达 到抑制肿瘤生长增殖。I期临床试验中58例肝癌患者接受每两周一次的静脉注 射治疗。

CDI47属免疫球蛋白超家族中高度糖基化的单次跨膜糖蛋白，是一种新的 细胞表面黏附分子，介导细胞与细胞和细胞与间质的黏附作用。研究证明，纯 化或重组的CD147可以在体外诱导成纤维细胞合成MMP-1、MMP-2、MMP-3。 随后对CD147和肿瘤关系的研究发现，在骨巨细胞瘤、泌尿系肿瘤、肺癌、乳 腺癌、结直肠癌、口腔鳞状细胞癌、神经胶质瘤、成釉细胞癌、子宫颈癌、子 宫内膜癌、骨髓癌、皮肤基底细胞癌、黑色素瘤、皮肤鳞状细胞癌等肿瘤细胞 中均发现CD147表达增高，同时MMP活性增加，且与肿瘤的浸润和转移相关。 免疫组织化学显示，相对于正常组织和癌旁组织，癌组织中CD147mRNA的 表达升高。CD147在原发性肿瘤和恶性程度较低的肿瘤中高表达，提示其在肿 瘤发展和早期转移中的作用。

体内研究显示，多种肿瘤基质成纤维细胞的MMP表达与CD147的表达水 平密切相关，提示在肿瘤与基质的相互作用中，CD147与MMP的表达发挥重 要作用。免疫组化结果显示，CD147主要在侵袭性肿瘤的外周表达，从而推测 CD147可能诱导了肿瘤的侵袭和转移。对黑色素瘤细胞系和口腔鳞癌细胞系的 体外研究证实，使用CD147抗体能够显著抑制肿瘤侵袭和转移。CD147还通 过旁分泌的方式与内皮细胞产生的MMP相互作用，提示肿瘤细胞产生的CD147 通过调节内皮细胞产生的MMP诱导肿瘤血管生成。CD147的作用不仅局限于 肿瘤-成纤维细胞、肿瘤-内皮细胞的相互作用中，CD147也可以在肿瘤细胞或 成纤维细胞中诱导MMP分泌。在肿瘤细胞中转染CD147或用重组的CD147 分子处理肿瘤细胞，发现肿瘤细胞本身MMP尤其是MMP-2的表达增加。在成 纤维细胞中转染重组CD147腺病毒载体，也可以诱导MMP-1和MMP-3高表 达。