[发明专利]公猪去异味重组噬菌体疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种用免疫学方法去除公猪内源性异味物质、改善肉质的公猪去异味重组噬菌体疫苗，属于分子生物技术领域。

背景技术

GnRH由丘脑下部的GnRH神经元合成，以颗粒或囊泡的形式贮存于细胞内，已从脊椎动物和原索动物的神经组织中分离出13种不同的GnRH，所有哺乳动物包括人类的GnRH结构是一样的，其氨基酸序列为：PYROGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，即焦谷氨酸-组氨酸-色氨酸-丝氨酸-酪氨酸-甘氨酸-亮氨酸-精氨酸-脯氨酸-甘酰肽。GnRH疫苗主动免疫动物后，可诱导动物机体产生特异性的抗GnRH的抗体，该抗体与动物自身分泌的内源性的GnRH结合并使其失去生物活性，从而导致下丘脑-垂体-性腺轴功能的破坏，抑制LH和FSH的释放，进而导致性腺内分泌变化。对雄性动物，导致类固醇激素分泌减少，睾丸及性腺萎缩，精子生成受阻；对雌性动物，则导致乏情期延长或不发情，卵泡发育、排卵及黄体形成受阻，卵巢、子宫萎缩。最终使动物大部分甚至完全丧失生殖能力。

在大多数家畜中，没经过去势的雄性动物要比经过去势的生长更快、效率更高，并且酮体品质更为优良。Wood等人发现未经去势处理的公猪比去势公猪生长更快，饲料报酬更高。Kuhlers等人报道，未经去势的公猪与同等体重经过去势的相比，眼肌面积明显增大。Robertson 等用GnRH 免疫公牛，发现免疫牛睾丸萎缩，性欲降低“去势”效果持续了6个月，并且其脂肪减少了32 %，第10肋骨处眼肌面积增加了50 % ，而同时料重比降低了12 %。

理论上生产未去势的公猪能带来明显的经济效益，但在实际生产过程中仍有许多不利因素需要克服。未去势公猪在性成熟后具有明显的攻击性，对圈养设施要求增高，需要分性别单独饲养，对饲养员的危险也明显增高。性成熟公猪爬跨频繁，猪群撕咬打斗增多，不但提高了受伤的几率还降低饲料报酬，给生产过程带来极大的不便。生产未去势公猪的另一个问题是这种猪肉在烹饪过程中发出令人不愉悦的味道，俗称“猪臊味”。有研究表明，出售未经去势的公猪肉有5%-35%的酮体具有另消费者不适的异味。公猪的异味在发情期首次出现，在公猪达到70kg体重或4个月年龄时逐渐升高，脂肪中异味物质含量较高的大多是体重大于95kg或生长期大于5个月的未去势公猪，但在去势后会逐步消失，其性行为也在去势后逐步消失转而变得温顺。我国生猪养殖过程多采用手术去势的方法来处理猪肉中的异味，这种方法简便彻底但也带来很多负面作用。猪的睾丸是高度管状且充满神经的，只能对未发育的幼年猪进行手术去势，对于性成熟的大猪则不适用。同时手术去势不仅降低猪的生产率和猪肉品质，还具有诸多风险：伤口出血、感染，严重的疝气，使动物发育不良或死亡。

近年来已经有多种方法被用来试图克服手术去势所带来的弊端，例如，体内植入激素法、化学去势法。激素处理需要反复多的注射，化学法去势能绝育但影响猪的生长性能。因此，需要一种既能抑制猪肉中的异味物质又不影响猪的生长性能的方法。本发明涉及的免疫去势法能够很好的兼顾这二者的需要。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种公猪去异味重组噬菌体疫苗。

本发明的公猪去异味重组噬菌体疫苗，以重组噬T7菌体为抗原，所说的重组T7噬菌体表面表达有氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的GnRH蛋白，所说的GnRH蛋白由三份拷贝的GnRH基因插入T7噬菌体P10B基因下游表达获得。

所述的三份拷贝的GnRH基因选自以下序列的核苷酸：

1)具有SEQ ID NO：1所示核苷酸序列；

2)具有SEQ ID NO：1所示序列经增加或减少拷贝数的核苷酸序列；

3)具有SEQ ID NO：1所示序列经改变、缺失或增加一个或几个核苷酸但仍表达具有GnRH主要抗原活性多肽的核苷酸序列。

所说的疫苗中还包含用于乳化重组T7噬菌体的白油佐剂。

本发明的公猪去异味重组噬菌体疫苗的构建方法，包括下列步骤：

A、构建重组噬菌体

(1)合成一段DNA序列，该DNA序列克隆至pUC-19载体多克隆位点中，DNA序列的5’端有酶切位点EcoRⅠ，3’端含有酶切位点HindⅢ，其DNA序列如SEQ ID NO：3所示；

(2)用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ将上述DNA序列从pUC-19载体上切下后插入T7噬菌体多克隆位点的EcoRⅠ和HindⅢ之间，构建重组噬菌体；