[发明专利]克隆青虾CHH基因的引物组及克隆青虾CHH基因的方法无效
| 申请号： | 201110303794.5 | 申请日： | 2012-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN102433329A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 吴滟;王宁;傅洪拓;乔慧 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/16;C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 214081*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 克隆 青虾 chh 基因 引物 方法 | ||
1.克隆青虾CHH基因的引物组，其特征在于，其由如下引物组成：
引物组1：
正向引物FS1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
反向引物RS4的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
引物组2：
正向外引物FC3-2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
正向内引物FC3-3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
反向外引物3′ RACE Outer Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
反向内引物3′ RACE Inner Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
引物组3：
正向外引物RC5-1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
正向内引物RC5-3的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
反向外引物5′ RACE Outer Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；
反向内引物5′ RACE Inner Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示。
2.一种克隆青虾GHH基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：从青虾眼柄中提取总RNA；
步骤2：然后RT进行cDNA 第一链合成；
步骤3：用引物组1扩增获得青虾CHH基因才cDNA序列中间片段；所述引物组1由如下引物组成：
正向引物FS1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
反向引物RS4的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
步骤4：用引物组2扩增获得青虾CHH基因cDNA序列的3’端片段；所述引物组2由如下引物组成：
正向外引物FC3-2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
正向内引物FC3-3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
反向外引物3′ RACE Outer Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
反向内引物3′ RACE Inner Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
步骤5：用引物组3扩增获得青虾CHH基因cDNA序列的5’端片段；所述引物组3由如下引物组成:
正向外引物RC5-1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；
正向内引物RC5-3的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；
反向外引物5′ RACE Outer Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；
反向内引物5′ RACE Inner Primer的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；
步骤6：将所述CHH基因的3’端和5’端片段拼接，即得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤4和5所述扩增为套式两轮PCR。
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