[发明专利]一种从植物中提取阿比刺桐酮V的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物中提取阿比刺桐酮V的方法，特别是涉及一种采用酶解和膜过滤技术从植物中提取阿比刺桐酮V的方法。

背景技术

阿比刺桐酮V是豆科线形灰毛豆Tephrosia linearis persoon的地上部分中的主要活性成分，是一种黄酮类化合物，分子式C₂₅H₂₈O₅，结构式：

阿比刺桐酮V具有抗微生物活性，MIC(μg/ml)：金黄色葡萄球菌为50、枯草杆菌为25、溶壁微球菌为12.5、表皮葡萄球菌为2.90、溶血性葡萄球菌为2.90、肺炎链球菌为2.90。还具有磷脂酶A2抑制剂的功效，其IC50为6μM。

经文献检索，尚未发现制备高含量阿比刺桐酮V的方法报道。

发明内容

本发明的目的提供一种从植物中提取阿比刺桐酮V的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

a.以线形灰毛豆的地上部分为原料，粉碎，加入3-5%生物酶溶液在40-50℃条件下酶解2-7小时，得到酶解原料；

b.酶解原料加5-8倍（V/W）50-65%乙醇溶液60-70℃保温浸泡1-2小时，提取2-3次，提取液浓缩干燥得到粗提物；

c.上述粗提物用65%甲醇溶液溶解，加入适量氯仿，搅拌均匀，静置分层后，取上层浓缩；

d.浓缩液注入高速逆流色谱仪，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，紫外在线检测，检测波长为288nm，收集目标成分，浓缩，结晶，分出结晶干燥得阿比刺桐酮V。

所述步骤a中生物酶为纤维素酶、淀粉酶和果胶酶中的一种或任意组合。

所述步骤d中正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为（1-2）:（8-10）:（2-3）:（10-13）。

本发明的积极效果是：

（1）本发明通过添加生物酶酶解，破坏了植物组织结构，有效成分容易溶出，降低提取温度，减少了高温对有效成分的破坏，也降低了能耗；

（2）本发明将粗提物用甲醇溶液溶解，加入氯仿，是一种液液分配色谱方法，除杂效果好。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

取线形灰毛豆的干燥地上部分1kg，粉碎，加入3%果胶酶溶液在40℃条件下酶解4小时，得到酶解原料，加8倍（V/W）55%乙醇溶液60℃保温浸泡2小时，提取2次，提取液浓缩干燥得到粗提物，用65%甲醇溶液溶解，加入适量氯仿，搅拌均匀，静置分层后，取上层浓缩，浓缩液注入高速逆流色谱仪，以体积比为2:9:3:12正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，控制流动相流速为2.5ml/min，紫外在线检测，检测波长为288nm，收集目标成分，浓缩，结晶，分出结晶干燥得阿比刺桐酮V12.6g，含量98.7%。

实施例2：

取线形灰毛豆的干燥地上部分10kg，粉碎，加入5%纤维素酶溶液在50℃条件下酶解5小时，得到酶解原料，加7倍（V/W）50%乙醇溶液65℃保温浸泡2小时，提取2次，提取液浓缩干燥得到粗提物，用65%甲醇溶液溶解，加入适量氯仿，搅拌均匀，静置分层后，取上层浓缩，浓缩液注入高速逆流色谱仪，以体积比为2:10:3:13正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，控制流动相流速为2ml/min，紫外在线检测，检测波长为288nm，收集目标成分，浓缩，结晶，分出结晶干燥得阿比刺桐酮V108.0g，含量98.8%。

实施例3：

取线形灰毛豆的干燥地上部分10kg，粉碎，加入5%淀粉酶溶液在50℃条件下酶解2小时，得到酶解原料，加5倍（V/W）65%乙醇溶液60℃保温浸泡1小时，提取3次，提取液浓缩干燥得到粗提物，用65%甲醇溶液溶解，加入适量氯仿，搅拌均匀，静置分层后，取上层浓缩，浓缩液注入高速逆流色谱仪，以体积比为1:8:2:10正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，控制流动相流速为3ml/min，紫外在线检测，检测波长为288nm，收集目标成分，浓缩，结晶，分出结晶干燥得阿比刺桐酮V115.8g，含量98.1%。

实施例4：

取线形灰毛豆的干燥地上部分10kg，粉碎，加入4%纤维素酶和淀粉酶复合酶（比例为1:1）溶液在45℃条件下酶解7小时，得到酶解原料，加6倍（V/W）60%乙醇溶液70℃保温浸泡1小时，提取3次，提取液浓缩干燥得到粗提物，用65%甲醇溶液溶解，加入适量氯仿，搅拌均匀，静置分层后，取上层浓缩，浓缩液注入高速逆流色谱仪，以体积比为2:10:3:13正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，控制流动相流速为2ml/min，紫外在线检测，检测波长为288nm，收集目标成分，浓缩，结晶，分出结晶干燥得阿比刺桐酮V111.9g，含量98.0%。