[发明专利]一种百子莲皂苷A的提取分离方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种百子莲皂苷A的提取分离方法。

背景技术

百子莲皂苷A（Agapanthussaponin A）属甾体皂苷类，分子式为C₄₅H₇₄O₁₉，分子量919.07，溶于正丁醇、甲醇、乙醇，不溶于丙酮。百子莲皂苷A对cAMP磷酸二酯酶呈抑制作用，IC₅₀为7μM。百子莲皂苷A主要来源于百合科闭口百子莲Agapanthus inapertus的地下部分。

目前，国内尚未见百子莲皂苷A的工业提取纯化方法的相关文献和专利的报道。

高速逆流色谱法（High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC），是一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此，在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种百子莲皂苷A的提取分离方法，该方法操作简单，产品含量高。

本发明是采用以下技术方案来实现的：

（1）取闭口百子莲原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；

（2）酶解原料中加8-15倍量50-70%甲醇常温浸泡提取1-3次，过滤得到提取液；

（3）提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1-3倍量的水饱和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0.5-1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；

（4）以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水（5-8:2-4:3-5:3-5）作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色谱仪，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品。

所述步骤（1）中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.3-1%。

所述步骤（4）中高速逆流色谱仪转速750-950r/min，流动相流速1.8-3.0ml/min。

本发明的积极效果是：

1）采用生物酶解分解物质组织结构，提高了提取率，缩短了提取时间，而且采用常温提取提取杂质少，能耗低；

2）高速逆流色谱法分离：无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

具体实施方式

实施例1：

闭口百子莲原料粉碎，过40目筛，称取3kg，加30g的果胶酶混合均匀，酶解3天，酶解原料加24L50%甲醇常温浸泡提取2次，每次4小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加800ml水分散，再加800ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加800ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水（5:2:3:3）作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2.0ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品0.7g，含量99.3%。

实施例2：

闭口百子莲原料粉碎，过60目筛，称取3kg，加30g的淀粉酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加45L70%甲醇常温浸泡提取8小时，过滤得到提取液，浓缩至浸膏，加900ml水分散，再加1000ml水饱和正丁醇萃取1次，合并萃取液，加1000ml丙酮沉淀，过滤，滤液浓缩干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水（6:4:5:5）作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将粗品粉末用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2.0ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为750r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集高含量百子莲皂苷A流分，浓缩干燥即得百子莲皂苷A产品1.0g，含量98.6%。

实施例3：