[发明专利]一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A的方法。

背景技术

钩状胡椒素A，属于查尔酮类化合物，淡黄色无定形粉末。

分子式：C₂₉H₃₀O₇；分子量：490.55。

现代药理研究表明，钩状胡椒素A具有细胞毒活性，对KB细胞有中等细胞毒活性ED₅₀为2.3微克/毫升。此外，钩状胡椒素还具有抗菌活性，对枯草杆菌、藤黄微球菌显示抗菌活性。在TLC上的MIC均为1.6微克。

钩状胡椒Piper aduncum L.遍布于亚洲和南美。巴布新几内亚沿海地区的居民用作防腐药治疗创伤。文献报道，经体外筛选发现该植物叶的提取物有强的灭螺(Biom phalaria glabrata)和显著的抗菌(枯草杆菌、藤黄细球菌和大肠杆菌)活性。

国内对钩状胡椒的研究较少，未见有钩状胡椒素A的相关研究报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种钩状胡椒素A的制备方法。该方法操作简单，产品含量高，重现性好。

一种从钩状胡椒中提纯钩状胡椒素A的方法，其特征在于：将钩状胡椒原料粉碎，用6-10倍重量的石油醚进行脱脂处理2-3次，将脱脂后的原料用相当于5-10倍药材重量的20%-90%乙醇加热回流提取2-3次，提取液合并，经超滤膜过滤，滤出液回收乙醇，浓缩液与ODS硅胶拌匀，烘干，干法上柱，密封，加压用乙醇-水-醋酸混合溶液洗脱，洗脱液浓缩后二次上ODS硅胶柱分离，用甲醇-水-醋酸混合溶剂加压洗脱，薄层监测，收集钩状胡椒素A流分，真空干燥得产品。

所述超滤膜截留分子量为1000-10000。

所述流动相是乙醇-水-醋酸（30~45：65：1）。

所述第一次上柱ODS硅胶为100~200目，加压控制流速在80-120ml/min，第二次上柱ODS硅胶为200~300目，硅胶柱加压控制流速在30-60ml/min。

综上所述，本发明存在以下优点：石油醚脱除脂溶性杂质，操作简单；膜分离除去鞣质，果胶，蛋白质，粘液质等大分子杂质，能耗小，无污染；采用ODS中压硅胶柱保证了洗脱剂的流速，加强了分离效果，重复上柱，所得产品纯度高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

下述实施实例中钩状胡椒素A的监测采用薄层色谱法，具体方法如下：

薄层色谱条件：

薄层板：硅胶G薄层板；

展开剂：乙酸乙酯-丙酮-水(10∶4∶1)；

显色剂：2%的FeCl₃乙醇液；

展开后，取出，晾干，喷以2%FeCl₃乙醇液，在日光下检视，供试品在与对照品色谱相应的位置上，有一相同颜色的单一斑点。

实施例1：

取钩状胡椒原料1kg，用6L石油醚进行脱脂处理3次，将脱脂后的原料用10kg20%乙醇加热回流提取2次，提取液合并，经截留分子量为1000的超滤膜过滤，滤出液回收乙醇，浓缩液与100目的ODS硅胶拌匀，烘干，干法上ODS硅胶柱，密封，加压用乙醇-水-醋酸混合溶液（30：65：1）洗脱，控制流速在120ml/min，洗脱液浓缩后再次上ODS硅胶（200目）柱分离，用甲醇-水-醋酸混合溶剂（35：65：1）加压洗脱，控制流速在30ml/min，薄层监测，收集钩状胡椒素A流分，真空干燥得产品38mg。

实施例2：

取钩状胡椒原料1kg，用10L石油醚进行脱脂处理2次，将脱脂后的原料用5kg90%乙醇加热回流提取3次，提取液合并，经截留分子量为10000的超滤膜过滤，滤出液回收乙醇，浓缩液与200目的ODS硅胶拌匀，烘干，干法上ODS硅胶柱，密封，加压用乙醇-水-醋酸混合溶液（35：65：1）洗脱，控制流速在80ml/min，洗脱液浓缩后再次上ODS硅胶（300目）柱分离，用甲醇-水-醋酸混合溶剂（45：65：1）加压洗脱，控制流速在60ml/min，薄层监测，收集钩状胡椒素A流分，真空干燥得产品31mg。

实施例3：

取钩状胡椒原料1kg，用8L石油醚进行脱脂处理3次，将脱脂后的原料用8kg40%乙醇加热回流提取3次，提取液合并，经截留分子量为8000的超滤膜过滤，滤出液回收乙醇，浓缩液与100目的ODS硅胶拌匀，烘干，干法上ODS硅胶柱，密封，加压用乙醇-水-醋酸混合溶液（30：65：1）洗脱，控制流速在100ml/min，洗脱液浓缩后再次上ODS硅胶（200目）柱分离，用甲醇-水-醋酸混合溶剂（38：65：1）加压洗脱，控制流速在40ml/min，薄层监测，收集钩状胡椒素A流分，真空干燥得产品42mg。